Ultimate色譜柱說明書

色譜柱的正確使用
色譜柱是昂貴的色譜耗材，正確的使用和維護對保證色譜柱的正常使用和延長壽命至關(guan) 重要。
1. 色譜柱使用前注意事項：
1) 色譜柱內(nei) 的存儲(chu) 液：
月旭公司色譜柱的存儲(chu) 液，如沒有特殊說明均為(wei) 質檢報告中所述流動相，檢測前，請用相互溶的試劑將其替換。
2) 新色譜柱的平衡：
新反相色譜柱：用純甲醇或者純乙腈衝(chong) 洗色譜柱30個(ge) 柱體(ti) 積（1個(ge) 柱體(ti) 積=空柱管體(ti) 積×0.7），再更換成能與(yu) 檢測流動相互溶的流動相衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積，zui後用流動相穩定係統至基線平穩；

新正相色譜柱：反相使用異丙醇低流速（0.2ml/min）衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積；正相使用采用正己烷分析流速衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積，再更換成能與(yu) 檢測流動相互溶的溶劑衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積，zui後用流動相衝(chong) 洗穩定係統至基線平穩待檢測。

2. 色譜柱的使用方向：
月旭公司生產(chan) 的星空体育全站標簽上的箭頭方向為(wei) 流動相流向，使用過程時也按此方向連接出入口，避免雙向混用，導致兩(liang) 端填料同時汙染，不利於(yu) 色譜柱的再生和維護。
3.流動相和樣品保持潔淨：
由於(yu) 懸浮在樣品或流動相中的細小顆粒會(hui) 堵塞色譜柱兩(liang) 端的篩板，各種試劑盡量使用色譜純級的，用量少的試劑純度至少是分析純，水是超純水和全玻璃器皿雙蒸水，使用前建議用0.45μm的濾膜過濾；

樣品溶液使用針頭式過濾器；
樣品中的雜質是造成色譜柱汙染、柱效下降的zui主要原因之一，複雜樣品可選樣品預處理柱（SPE柱）進行前處理，如果不方便處理，建議使用與(yu) 分析柱相匹配的保護柱。樣品溶劑與(yu) 流動相要相匹配，不能出現樣品溶劑與(yu) 流動相不互溶，極性相差太大等情況，否則會(hui) 造成色譜峰形變差、鬼峰等現象，使用流動相溶解樣品能有效的避免上述情況發生。
4.色譜柱允許使用的pH範圍：
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH範圍，請仔細對照您的色譜柱的使用pH範圍（表一），在pH範圍以外使用，會(hui) 使矽膠基質溶解或鍵合相水解，對色譜柱造成不可恢複的損傷(shang) ，如果在臨(lin) 界pH處使用，分析結束後立即用適合於(yu) 色譜柱保存並與(yu) 當前使用的流動相互溶的淋洗液置換掉。

色譜柱的保存
短時間保存：
間隔不超過四天，色譜柱按平時維護程序衝(chong) 洗至基線平穩，反相色譜柱保存在不含有緩衝(chong) 鹽、離子對試劑的有機相/水溶液中，有機相不低於(yu) 20%；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用保存在純有機溶劑中，並將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
長期保存：
反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用時需將柱內(nei) 存儲(chu) 液用異丙醇置換，zui後用正己烷保存，將色譜柱從(cong) 儀(yi) 器上取下，並將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

色譜柱的日常維護（推薦反向衝(chong) 洗）：
反相使用（包括反相色譜柱和正相色譜柱反相使用）清洗方法：
1) 未使用緩衝(chong) 鹽，分析完成後用80%甲醇或80%乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱10-20個(ge) 柱體(ti) 積，保存柱子；
2) 使用緩衝(chong) 鹽，用過渡流動相或者低比例有機相反向衝(chong) 洗柱子10-20個(ge) 柱體(ti) 積去除緩衝(chong) 鹽，用80%甲醇或80%乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱10-20個(ge) 柱體(ti) 積，保存柱子；
3) 使用離子對試劑，用過渡流動相或者低比例有機相反向衝(chong) 洗柱子10-20個(ge) 柱體(ti) 積去除緩衝(chong) 鹽，再用50%甲醇反向衝(chong) 洗柱子10個(ge) 柱體(ti) 積，zui後用80%甲醇反向衝(chong) 洗色譜柱10-20個(ge) 柱體(ti) 積，保存柱子。
正相使用（正相色譜柱正相使用）清洗方法：
分析結束後，用異丙醇反向衝(chong) 洗10~20個(ge) 柱體(ti) 積再換正己烷反向衝(chong) 洗柱子10-20個(ge) 柱體(ti) 積，保存柱子。

色譜柱的異常維護（按照日常維護衝(chong) 洗方向）
1. 柱壓升高
柱壓升高是每個(ge) 色譜工作者都很頭疼的問題，長時間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正常現象；短時間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高，排除儀(yi) 器的故障，確定是色譜柱自身原因，一般有以下幾點：

1) 柱頭的過濾篩板汙染（固體(ti) 顆粒物堵塞、強保留物質累積）：

解決(jue) 方法：
a.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向衝(chong) 洗色譜柱180min；

b.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，反向使用；
c.可將柱頭打開，將色譜柱頭中過濾篩板取出，在稀硝酸溶液內(nei) 超聲清洗20min，純水超聲清洗20min，zui後用甲醇超聲清洗20min，重新裝入色譜柱。

2) 柱頭填料汙染（固體(ti) 顆粒物堵塞、強保留物質累積）：
解決(jue) 方法：
a.用可以溶解汙染物的溶劑較長時間（180min）反向衝(chong) 洗色譜柱；
b.可將柱頭打開，小心取出被汙染的填料，用相同的填料重新裝入修複。
3) pH使用不當造成的損傷(shang) ：
解決(jue) 方法：
pH使用不當造成固定相的缺失或塌陷，很難使色譜柱恢複，隻能更換色譜柱。

2. 推薦使用保護柱和在線過濾器：
樣品和流動相中不能*過濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產(chan) 生的固體(ti) 顆粒物，進入到色譜柱中就會(hui) 堵塞篩板，導致柱壓升高，柱效下降，保護柱和在線過濾器上都有篩板，孔徑與(yu) 分析柱的孔徑相同，能阻止顆粒物到達色譜柱，在分析故障中，柱壓升高占很大比例，因此建議您在色譜柱前端加上在線過濾器或者保護柱。
3. 緩衝(chong) 鹽的正確使用：
緩衝(chong) 鹽通常易溶於(yu) 水，難溶於(yu) 有機溶劑，其使用不當會(hui) 析出，加快泵柱塞杆和密封圈，流通閥的磨損，堵塞色譜柱頭篩板，填料基質上的微孔和顆粒間的間隙，使填料板結柱壓升高，阻礙基質上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降，柱效降低，縮短其使用壽命，緩衝(chong) 鹽析出後很難去除，因此正確的使用緩衝(chong) 鹽對延長色譜柱的使用壽命非常重要，具體(ti) 方法如下：“使用前過渡! 使用後衝(chong) 洗!”

分析前用過渡流動相衝(chong) 洗柱體(ti) 積5~10個(ge) 柱體(ti) 積，分析完成後按照色譜柱日常維護2)項處理；
過渡流動相：有機相和水相的比例和分析流動相中兩(liang) 相比例一致，或者水相比例高於(yu) 分析流動相，不含緩衝(chong) 鹽。
緩衝(chong) 鹽析出處理方案：
1) 方案1：用甲醇/水＝10/90以分析速度流速35℃條件下反向衝(chong) 洗色譜柱40個(ge) 柱體(ti) 積；
2) 方案2：用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向衝(chong) 洗色譜柱過夜。

4. 避免強保留物質在色譜柱保留：
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，是一個(ge) 緩慢的過程，一段時間後會(hui) 對樣品成分產(chan) 生額外的保留行為(wei) ，引起峰變寬，拖尾，使柱效下降，保留時間變化，到一定程度時會(hui) 導致柱壓升高，對許多樣品特別是複雜樣品很難判斷其是否含有強保留物質，因此要預防這一切的方式，堅持每天分析完成後用純甲醇或純乙腈反向衝(chong) 洗色譜柱20個(ge) 柱體(ti) 積以上。但若長時間沒有反向衝(chong) 洗的柱子，請謹慎反衝(chong) 。
注意：不要輕易打開柱頭，因為(wei) 柱頭一旦打開，很難恢複到新柱的水平，因為(wei) 柱頭打開而造成的檢測後果，客戶自行負責。

各種鍵合相色譜柱的再生(請慎用)
色譜柱作為(wei) 液相色譜中昂貴的色譜耗材，會(hui) 隨著使用時間和進樣次數的增加，會(hui) 出現異常的色譜現象，如果一根色譜柱的柱效太低或者柱壓太高，通常認為(wei) 該色譜柱使用壽命已到，為(wei) 了延長色譜柱的使用壽命，除了*按照每一款色譜柱的性能使用以外，適當的色譜柱再生是很有效的途徑：

1. 氰基(CN)色譜柱的維護和再生：
CN柱屬於(yu) 中等極性的固定相，作反相色譜時操作和維護和C18柱*相同，增加水相比例，可以促進樣品的洗脫，但是CN屬於(yu) 短鏈的鍵合相，水相比例太高易使CN鍵水解，尤其在色譜柱pH耐受範圍以外，酸性和堿性條件下柱壽命會(hui) 下降很快，如果在這個(ge) 條件下使用，需要按以下程序用15個(ge) 柱體(ti) 積溶液衝(chong) 洗，如下：

過渡流動相–95%乙腈並保持95%乙腈繼續衝(chong) 洗，以低流0.2mL/min過夜衝(chong) 洗；
在pH耐受範圍條件使用時，也比較傷(shang) 柱子，要注意衝(chong) 洗，可以參照上述方法，時間可適當減少。CN柱用於(yu) 正相時，當柱子使用一定時間後，柱效下降，可清洗一下恢複柱性能，再生時用10個(ge) 柱體(ti) 積的下列溶液衝(chong) 洗：氯仿 –異丙醇–二氯甲烷再走流動相即可；

CN柱的pH範圍在pH 2.0-8.0。

2. 反相柱的再生：
反相色譜柱是使用zui普遍的色譜柱之一，除按照以上內(nei) 容使用以外，必要的再生清洗可以有效的延長色譜柱的使用壽命，用下列每種溶劑20~30個(ge) 柱體(ti) 積衝(chong) 洗：
100％甲醇–100％乙腈–100％異丙醇–100％二氯甲烷或100％正己烷–100％異丙醇–100％甲醇

3. 正相色譜柱的再生：

正相柱的鍵合官能團氨丙基、二羥基丙基等要比C18,C8柱的鍵合官能團易水解，所以其使用壽命稍短，特別是使用反相條件時，要嚴(yan) 格控製pH值範圍，pH值越低流動相中水的比例越高越易發生水解。

填料被樣品中雜質累積汙染，色譜柱表現行為(wei) 柱壓增高柱效降低等，依次用下列程序衝(chong) 洗柱子：
甲醇–乙腈–異丙醇–氯仿–正己烷–氯仿–異丙醇–甲醇（各以0.5ml/min的流速，20個(ge) 柱體(ti) 積），再換流動相。

用氨基柱檢測酸性物質可能會(hui) 使略帶負電荷的氨基官能團質子化，一定程度上改變對某類的分析物保留性質或表現為(wei) 柱效下降，再生建議是：用5-10個(ge) 的柱體(ti) 積的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液衝(chong) 洗（衝(chong) 洗後用不含堿的流動相洗去多餘(yu) 的氨），分析酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。

如何改善和提高正相色譜的重現性？
在正相色譜分離模式中，水是一種溶劑強度非常高的溶劑，即便流動相中有少量的存在就能對保留時間產(chan) 生強烈的影響，特別是在矽膠或氧化鋁為(wei) 固定相而使用的流動相非極性或疏水性很強的情況下尤
其是這樣。因為(wei) 烷烴類溶劑天然含水量極低，基於(yu) 無水烷烴的流動相，需要很長時間才能和環境中水分達成平衡。所以，正相色譜柱使用幾天後就觀察到保留時間有漂移的現象是司空見慣的。可能正是存在這個(ge) 令人頭疼的問題，成為(wei) 了當今正相色譜沒有反相色譜那麽(me) 普及常用的主要原因。有一個(ge) 非常有效的改善正相色譜保留時間重現性的方法：使用和水“半飽和”的正相流動相。
“半飽和”流動相配置方法：將無水的非極性流動相分成兩(liang) 半；其中一半中加入一定量水，並混勻攪拌約一小時，靜止分層後，將多餘(yu) 的水相全部除去；將無水的一半流動相和已與(yu) 水飽和過的另一半流
動相兩(liang) 部分重新混合在一起，就配成了“半飽和”流動相。
正相色譜柱除水：
正相柱一般用的流動相是正己烷等非極性溶劑,水是強極性溶劑,正相色譜中用的量很少，水含量稍微一點的小變化，就會(hui) 對出峰時間有很大的影響，所以正相色譜對水分含量極敏感。正相填料，矽膠、
氨基、CN基等，本身並無特殊，也不是碰到水就會(hui) 損壞的。隨著時間的推移，正相填料會(hui) 因為(wei) 吸附了過多的水分而改性，導致保留能力改變，故需要按使用下列溶劑對固定相進行脫水：
含2.5% 二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5% 冰醋酸的正己烷衝(chong) 洗30個(ge) 柱體(ti) 積。