色譜柱粒徑越小，分離度一定越好嗎？

在液相色譜方法開發過程中，色譜柱對於(yu) 分離效果的影響是最大的。色譜柱的參數包括：鍵合相、柱長、直徑、粒徑、孔徑。

做過液相的工程師肯定都深深記牢這句口訣：

同等長度的色譜柱，粒徑越小，分離效果越好；

同等粒徑的色譜柱，長度越長，分離效果越好；

同等粒徑的色譜柱，內(nei) 徑越小，最佳的體(ti) 積流速越小。

那麽(me) ，在相同的方法條件下，同等長度的色譜柱，粒徑越小，分離效果一定越好嗎？小編帶您在實操中一探究竟。

案例一：兒(er) 茶酚胺及代謝物的測試

兒(er) 茶酚胺即含有鄰苯二酚（即兒(er) 茶酚）結構的胺類化合物，包括多巴胺、去甲腎上腺素和腎上腺素及它們(men) 的衍生物。

案例二：某雜質A和雜質B的分離

從(cong) 上兩(liang) 圖中可以看出，在方法不做大的調整情況下，使用月旭AQ-C18（4.6*250mm，3μm）規格的色譜柱，雜質A和雜質B之間的分離度僅(jin) 達到1.2（圖3）。經過多種方法的優(you) 化，雜質A和雜質B的分離度仍徘徊在1.2左右。

更換月旭AQ-C18（4.6*250mm，5μm）規格的色譜柱，僅(jin) 調整流速，雜質A和雜質B之間的分離度達到1.6（圖4），滿足分析要求。

原理分析：

Van Deemter方程第一項即為(wei) 渦流擴散項。色譜柱中充滿了固定相填料，而這些填料的存在會(hui) 阻礙溶質分子運行，填料粒徑越大，溶質分子“繞行"距離就越遠，即在填料孔徑中停留的時間就越長。

在案例一中：兒(er) 茶酚胺類物質屬於(yu) 強極性物質，在色譜柱上保留弱。在相同填料、相同內(nei) 徑和長度的色譜柱以及檢測條件下，相同流速的流動相對保留在3μm粒徑的UHPLC色譜柱上的兒(er) 茶酚胺類物質的洗脫能力比1.8μm粒徑的UHPLC色譜柱的要弱，所以達到了分離度增加的效果。

在案例二中：色譜柱均為(wei) 4.6*250mm規格的色譜柱，僅(jin) 粒徑不同。該規格下5μm粒徑的色譜柱最佳流速為(wei) 1mL/min，3μm粒徑的色譜柱最佳流速需要達到1.67mL/min，而這個(ge) 流速下的壓力已經超過HPLC的耐壓值，故無法采用最佳流速。最終，5μm粒徑的色譜柱使用的是最佳流速1mL/min，3μm粒徑的色譜柱僅(jin) 使用0.8mL/min的流速，遠低於(yu) 最佳流速，故分離效果並沒有5μm色譜柱好。

經過以上兩(liang) 個(ge) 案例，對於(yu) 較難分離的分析物，小夥(huo) 伴們(men) 如果嚐試多種方法仍未達到令人滿意的分離效果，不妨嚐試把色譜填料的粒徑改大或改小，都可以試試，可能會(hui) 有意想不到的效果哦！