磷酸鹽緩衝溶液配製方法及優化案例

緩衝(chong) 液的作用是在一定的範圍內(nei) 緩衝(chong) 調整溶液的pH值，使待測溶液的酸度符合分析方法所規定的範圍。其中，磷酸鹽緩衝(chong) 液截止波長低於(yu) 200nm，在較低分析波長下仍可使用，具有三個(ge) pKa值，可提供1.1~3.1，6.2~8.2，11.3~13.3三個(ge) pH緩衝(chong) 範圍，是HPLC在紫外檢測條件下zui常用的緩衝(chong) 液之一。

配製磷酸鹽緩衝(chong) 液時，通常所說的濃度0.01M指的是緩衝(chong) 溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na⁺或K⁺的濃度，Na⁺或K⁺的作用是調節滲透壓。

各種濃度PB(pH=7.4)的配製：

先配0.2M PB（pH=7.4，100mL）：取0.2 mol/L的Na₂HPO₄母液81mL及0.2mol/L的NaH₂PO₄母液19mL，混勻。然後隻需將0.2M PB（pH=7.4）按相應比例

適當稀釋即可，如：

0.1M PB（pH=7.4）：取500mL 0.2M PB，加水稀釋至1L。

0.01M PB（pH=7.4）：取50mL 0.2M PB，加水稀釋至1L。

0.02M PB（pH=7.4）：取100mL 0.2M PB，加水稀釋至1L。

以上配製方法可供參考。日常配製流動相時常使用緩衝(chong) 鹽搭配酸/堿溶液進行pH調節。

在使用酸/堿溶液調節緩衝(chong) 溶液的pH時，使用低濃度（0.1mol/L）比使用高濃度（1mol/L）引起的誤差更小，對緩衝(chong) 溶液pH的重複性和分析結果的重現性更有優(you) 勢，尤其是針對一些對pH敏感的分析項目。

應用案例：

客戶反饋參考應用報告的液相條件，同一台液相，不同天配製的流動相，配製方式一樣，分離重現性不好，有時能分開，有時會(hui) 重合無法分離。了解到客戶稱取磷酸鹽後溶於(yu) 1L超純水中後，再滴加1mol/L堿溶液進行pH調節。此方法容易造成配製差異，引起峰分離情況差異。

優(you) 化流動相配製方法：

① 精密稱取Mg±0.001g磷酸鹽，溶於(yu) 約800mL超純水中溶解。

② 預先配製0.1mol/L氫氧化鈉/氫氧化鉀溶液，稱樣量Ng±0.001g，用量筒準確量取100mL堿溶液備用。

③ 將量取的堿溶液緩慢加入已溶解的磷酸鹽溶液中，觀察pH變化，達到目標pH後，停止加入堿溶液，記錄所需堿溶液體(ti) 積。

④ 再在緩衝(chong) 鹽溶液中加入超純水定容至1L。

⑤ 後續配製隻需量取固定體(ti) 積的堿溶液加入固定稱樣量的緩衝(chong) 溶液中，即可達到固定的pH。成功減小流動相配製差異，提高峰分離重現性。

效果見下圖：

結論：

流動相pH的穩定性與(yu) 準確性對樣品分析的影響較大時，需盡量規避流動相配製時的人員誤差，環境誤差，儀(yi) 器誤差，物料稱量誤差等，以保證方法分析效果的重現性。