正相？反相？手性分離模式如何選擇？

哈嘍，小夥(huo) 伴們(men) ，還記得上個(ge) 世紀五、六十年代震驚世界的“反應停事件"嗎？反應停學名為(wei) 沙利度胺Thalidomide，結構見下圖，其消旋體(ti) 曾被用作緩解妊娠反應的藥物。但是後來才發現其中的R-型異構體(ti) 才是有效的抗嘔吐成分，可減輕妊娠e心、嘔吐等症狀；而S-型異構體(ti) 則會(hui) 導致嬰兒(er) 畸形，結果當時在西德、荷蘭(lan) 和日本等地區產(chan) 生了大批的畸形兒(er) 。

隨著生物工程和生命科學的發展，科學家已經認識到，手性化合物例如手性藥物異構體(ti) 盡管其物理和化學性質幾乎wan全相同，隻有旋光性不同，但它們(men) 在生物體(ti) 內(nei) 的生理活性和藥理作用卻存在很大的差別。為(wei) 此，製藥行業(ye) 中，必須對有效成分的對映體(ti) 進行拆分，而不能將其混合物作為(wei) 藥物出售。 

采用液相色譜法分離手性化合物，是目前shou選方法之一，要考慮手性柱的固定相類型、分離模式及流動相溶劑。現在市麵上手性固定相類型較多，手性色譜有正相分離和反相分離兩(liang) 種模式，流動相溶劑的選擇與(yu) 固定相、樣品性質、分離模式有關(guan) 。今天，小編就和大家聊聊，如何選擇合適的手性分離模式。

當樣品溶於(yu) 非極性溶劑中，選擇正相分離模式。常用的流動相組合是烷烴類和醇類。其中，醇類起到了洗脫作用，烷烴類用來調節流動相的洗脫強度。

烷烴類試劑，可選擇正己烷、正戊烷、異己烷、正庚烷，它們(men) 對樣品分離沒有太大影響，不會(hui) 改變選擇性和分離度，選擇正己烷較多。

流動相中的醇類，對目標物的分離起關(guan) 鍵作用，不同的醇有不同的選擇性，且隨著流動相中醇類的比例提高，目標峰的保留時間縮短。zui常用的醇類是乙醇和異丙醇，它們(men) 的洗脫能力是：乙醇>異丙醇。甲醇在烷烴中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烴中加入甲醇，最好同時加入一定量的乙醇，提高流動相的溶解性。

在手性色譜中，為(wei) 改善目標物的峰形，需要在流動相中添加酸或者堿。如果目標物是酸性化合物，往往要在流動相中加入酸性添加劑，如三氟yi酸、乙酸、甲酸等。如果目標物是堿性化合物，要在流動相中加入堿性添加劑，如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或堿性添加劑的加入量一般為(wei) 0.1%~0.3%，最大不超過0.5%，要注意色譜柱的pH耐受範圍。

需要注意的是：

1、正相色譜柱安裝前，必須先用合適的流動相衝(chong) 洗整個(ge) 儀(yi) 器管路，包括進樣器。有些試劑（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亞(ya) 碸、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF）會(hui) 破壞手性固定相的結構，請不要使用這些溶劑作為(wei) 流動相的組成部分，或者作為(wei) 樣品稀釋劑。如果有無法確定的，請谘詢廠家。

2、色譜柱能使用純甲醇或者純乙腈作為(wei) 流動相，如果要將正己烷換成甲醇或者乙腈，或者換成其他極性溶劑，需要用純異丙醇作為(wei) 溶劑充分過渡。

3、正相手性柱應避開含水的流動相。

溴甲ji苯異丙酸消旋體(ti) 的測定

液相條件

色譜柱：Ultimate^® Cellu-J（4.6×250mm，5μm)  。 

流動相：正己烷：乙醇：三氟yi酸（90：10：0.1）；

檢測波長：220nm；

柱溫：25℃；

流速：1mL/min；

進樣量：10μL；

樣品配置：1mg/mL，乙醇/正己烷（1/1）溶解。

如果樣品溶於(yu) 含水極性溶劑時，選擇反相分離模式。常用的流動相組合是有機相和水相。其中，水相用來調節流動相的洗脫強度，常用的水相可以是磷酸鹽緩衝(chong) 液，或者是純水。有機相起到了洗脫作用，常用的有機相是乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇等，且有機相比例越高，目標物的保留時間越短。

鹽酸達泊xi汀的測定

液相條件

色譜柱：Ultimate^® Cellu-JR（4.6×250mm，5μm)  。 

流動相：甲醇：乙醇：二乙胺（95：5：0.1）；

檢測波長：220nm；

柱溫：20℃；

流速：0.6mL/min；

進樣量：5μL；

樣品配置：1mg/mL，甲醇溶解。

目前，月旭科技的手性固定相填料包括 Cellu-D、Cellu-J、Amy-D等，可以滿足絕大多數手性樣品分離需求。各位小夥(huo) 伴有手性樣品分離或需要篩選柱子，歡迎聯係月旭售前技術熱線或當地銷售。