藥品中基因毒性雜質的痕量分析，非得用MS嗎？

目前對於(yu) 藥品中含有的極少量物質（如基因毒性雜質等），在對其進行痕量分析時，通常采用的檢測手段是：利用先進的液質聯用（如LC-MS或LC-MS/MS等）、氣質聯用（如GC-MS或GC-MS/MS等）設備，對其微量物質進行檢測時所需液相色譜係統可能為(wei) 更高級的超高效液相色譜儀(yi) 。

如檢測藥物中含有亞(ya) 硝胺類基因毒性雜質NDMA，根據不同原料藥的性質不同，目前國際上公布的方法主要有：GC-MS法、GC-MS/MS法、UPLC-APCI-MS/MS法，HPLC-UV法（EDQM公布）。國內(nei) 官fang公布的方法主要有GC-MS法、GC-MS/MS法、UPLC-APCI-MS/MS法，如中國藥典2015年版二部推薦使用GC-MS法（詳見《纈沙坦》原料中N-ya硝基二甲胺的含量測定方法），不推薦使用HPLC-UV法，因為(wei) HPLC-UV法靈敏度比質譜儀(yi) 的靈敏度差很多，而且專(zhuan) 屬性差些，容易受到檢測幹擾，故HPLC-UV法具有很大的局限性，隻能準確測定那些含量相對較高的物質。

然而現有檢測技術中：

● 質譜儀(yi) 價(jia) 格昂貴，運行成本高，所需的試劑要求高，抗幹擾能力差，維護保養(yang) 費用很高，同時對質譜儀(yi) 操作人員的水平要求非常高，需要高層次的人才方能準確操控。故質譜儀(yi) 普及率非常低，一般企業(ye) 較少購置，對於(yu) 需要使用質譜儀(yi) 進行痕量分析時隻能委托特定的機構使用質譜儀(yi) 進行檢測。

● 氣相色譜/質譜法操作過程繁瑣，經過前處理後樣品損失嚴(yan) 重。

● 高效液相色譜儀(yi) 價(jia) 格便宜，操作容易，覆蓋麵廣，一般企業(ye) 均很常見。但是單純使用HPLC-UV法進行檢測含量極少的物質時，其靈敏度差，不能準確定量檢測出複雜原料藥中含量極低的物質，且檢測過程中目標化合物所受幹擾亦較大，目標化合物與(yu) 其它雜峰之間的分離難度較大。

基於(yu) 以上痕量檢測的難點，沒有質譜儀(yi) 的幫助，實驗人員是否可以通過長期大量的研究，不斷嚐試各項色譜條件的調試，諸如：流動相試劑的組成、梯度程序設置、柱溫、流速的改變等。

特別是色譜柱的篩選，如雖然同樣都是十八烷基矽烷鍵合色譜柱，可以嚐試不同品牌、不同係列的C18柱，色譜柱間填料的差異會(hui) 呈現出對樣品的不同選擇性。另外，色譜柱規格的差異也會(hui) 帶來不同的檢測效果，如色譜柱的內(nei) 徑越細靈敏度越高、色譜柱越長柱效越高、填料的粒徑越小分離效率越高……光是色譜柱就有多達7項以上的可調節參數。

最近就有一家藥企嚐試走了這樣一條路，對尼紮替丁中所含痕量雜質N-ya硝基二甲胺（NDMA）檢測方法進行了長期研究，最終探索出一種采用HPLC法測定樣品中NDMA的方法，該方法簡便快速，且測定結果準確。

這就是湖南威特製藥股份有限公司。在他們(men) 的開發報告中記錄到：

“我們(men) 首先嚐試解決(jue) 了色譜分離的問題，因供試品溶液濃度很大，其他峰對目標物質NDMA的幹擾較多，在摸索優(you) 化檢測方法的過程中，對色譜柱的選擇做了大量的工作，既要不被幹擾，又要保證峰形正常，且需能夠增加該峰的檢出能力，最後選擇了特定的月旭Ultimate^® ODS-3  4.0×250mm，3μm色譜柱，且此型號的色譜柱批間差異較小。保證了該方法成功通過了方法學驗證，並最終獲得了發明專(zhuan) li授權。”

湖南威特測試了來自至少4個(ge) 色譜柱廠家的十幾種C18柱，最終月旭Ultimate^® ODS-3 4.0×250mm，3μm這款柱子展現了其du特的分離和檢測特性，4.0mm內(nei) 徑具有更高的靈敏度，3μm粒徑也提供了更高的柱效。在這款色譜柱的基礎上，客戶繼續配合優(you) 化其他的色譜條件，最終確定了這個(ge) 簡便快捷，且測定結果準確的HPLC方法。

艱辛的付出，終於(yu) 獲得了回報。感謝湖南威特為(wei) 我們(men) 示範了超高的液相方法開發水平，展示了不同色譜條件配合玩轉色譜柱，為(wei) 方法開發帶來的無限可能！

參考文獻：

一種HPLC法檢測尼紮替丁中N-ya硝基二甲胺的方法

（專(zhuan) li號：ZL202110045224.4；授權公告日：2023.07.28）