前沿平緩,後沿陡峭的不對稱色譜峰稱前沿峰。當色譜峰的對稱因子在0.95~1.05為(wei) 正常峰;小於(yu) 0.95為(wei) 前沿峰;大於(yu) 1.05為(wei) 拖尾峰。一般情況下,0.9~1.2的色譜峰均可被接受。
在日常的液相色譜分析過程中,前沿峰也是我們(men) 經常遇到的色譜圖問題。那今天我們(men) 就來學習(xi) 下,前沿峰的緣由以及該如何應對。
01前沿峰的影響
影響峰高的計算
峰麵積相同情況下,由於(yu) 峰前沿,它們(men) 的峰高會(hui) 相差很多。當我們(men) 使用峰高來計算樣品結果時就產(chan) 生影響,尤其是計算zui低檢出xian時會(hui) 比較明顯。
影響峰麵積的計算
當計算峰麵積時,峰的起點和終點一般通過色譜峰的斜率來確定。色譜峰前沿,它的前部基線越平緩起點就越難確認,導致峰麵積定量不準。
影響對某些痕量組分的確認
當前麵的峰分離度不是很好時,樣品峰就會(hui) 容易被隱藏在後麵峰的前沿處從(cong) 而無法計算。
02前沿峰原因分析及解決(jue) 方案
柱過載
每一根色譜柱都有其最大樣品承載量,當樣品量過多時會(hui) 出現超載現象,包括質量過載和體(ti) 積過載。我們(men) 可通過降低樣品量或者樣品濃度來看峰形是否有所改善。也可增加柱直徑,采用較高容量的固定相來解決(jue) 。
樣品溶劑選擇不恰當
當樣品溶劑的洗脫能力大大強於(yu) 流動相時會(hui) 出現前沿峰。具體(ti) 就是說,樣品在色譜柱中均勻的往前移,我們(men) 通常會(hui) 得到呈正態分布的峰。當樣品溶液進樣後到達色譜柱的時間比較短,在未被流動相充分稀釋時,由於(yu) 洗脫能力比較強的樣品溶劑存在,使部分樣品被洗脫的速度加快,快速通過色譜柱,最終導致峰前延。例如,在反相色譜中用乙腈做樣品溶劑,如果流動相的洗脫力較弱時就會(hui) 出現前沿峰。我們(men) 可以選擇流動相或者接近流動相的比例的試劑作為(wei) 樣品溶劑。
色譜柱損壞
色譜柱在長時間使用之後就會(hui) 導致矽膠填料的溶解,柱床崩解,從(cong) 而柱效降低導致峰前沿。如果排查出是色譜柱損壞,建議直接更換色譜柱。
峰幹擾
兩(liang) 個(ge) 化合物共洗脫,即在大峰前有小峰出現,色譜峰沒有分開。可通過增加樣品淨化程序,減少幹擾。也可調整流動相提高分離度。