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不可不知,反相流動相該如何選擇

更新時間:2023-03-22 點擊次數:1169

在HPLC中,流動相是純溶劑或者混合溶劑以及帶有固體(ti) 改性劑的溶劑。色譜工作者可以針對HPLC的不同應用在數百種溶劑中進行選擇。溶劑的選擇要考慮諸多因素,如溶劑的粘度、折射率、腐蝕性、透明度等,還有商業(ye) 價(jia) 格。流動相的溶劑強度或有機溶劑百分比可控製分析物的保留時間。

1、什麽(me) 是流動相

流動相是使分析物通過色譜柱的溶劑。分析物存在於(yu) 適當的溶劑中,在樣品製備後注入色譜柱係統。該溶劑不被視為(wei) 新基質,因為(wei) 它不會(hui) 幹擾分析。可以在樣品製備過程中選擇分析物的載體(ti) 的性質,以滿足特定要求,例如揮發性和與(yu) HPLC中流動相的混溶性。在反相色譜柱中,流動相比固定相更具極性。一般來說極性流動相是shou選,因為(wei) 分離效果表現出更好的重現性。

分析物在流動相中的溶解度在色譜柱中也起著重要作用。對於(yu) 溶於(yu) 水或部分水性溶劑的化合物,選擇反相HPLC不是問題,但對於(yu) 不溶於(yu) 極性溶劑的化合物,通常需要使用正相色譜柱。樣品極性,固定相極性和流動相極性的評估對於(yu) 色譜柱的選擇也很重要。

2、流動相的一般選擇要求

純度

所有溶劑都應該具有最高的純度和質量。HPLC級溶劑經過預過濾和純化,在紫外線下具有最小的吸光度。因此,他們(men) 不含會(hui) 在色譜圖基線中產(chan) 生假峰的雜質。緩衝(chong) 液製備中使用的水具有最高純度。去離子水通常含有痕量有機化合物,因此不推薦用於(yu) HPLC。

粘度

為(wei) 了保持可接受的壓降(<2500psi)和合理的流過HPLC色譜柱的流速,流動相粘度應盡可能低。較低粘度的流動相產(chan) 生狹窄的色譜峰。例如乙腈通常是反相HPLC的shou選溶劑,因為(wei) 它不僅(jin) 粘度低於(yu) 甲醇或異丙醇,而且具有良好的保留特性。

沸點

如果涉及樣品回收,沸點很重要,低沸點溶劑更容易從(cong) 樣品中去除。

無腐蝕性

溶劑必須對HPLC係統組件無腐蝕性。

混溶性

並非所有HPLC溶劑都可混溶。如果混合了不能混合的溶劑可能會(hui) 導致一些問題,例如不穩定的基線,波動的壓力等。異丙醇可與(yu) 大多數常見的HPLC溶劑混溶。因此,在不確定最後使用的溶劑係統的情況下,它可以用來衝(chong) 洗HPLC的流路

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