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影響峰漂移的常規因素有哪些?

更新時間:2022-12-29 點擊次數:2403

相信大部分實驗室工作者在日常檢測中,或多或少都有遇到過讓大家比較頭痛的一個(ge) 實驗現像就是:當我們(men) 連續進樣的時候,樣品的保留時間不能重現,主要分為(wei) 保留時間漂移和保留時間波動。顧名思義(yi) 前者是指保留時間僅(jin) 沿單方向發生變化,而後者指保留時間無固定規律的波動。一般在查找原因時將此兩(liang) 種情況區分開來排查,對找到問題的原因往往很有幫助。

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導致樣品保留時間漂移和保留時間波動

幾種最常見的原因

色譜柱平衡

如果我們(men) 觀察到保留時間漂移,首先應考慮色譜柱是否已用流動相wan全平衡。通常平衡需要10-20個(ge) 柱體(ti) 積的流動相,但如果在流動相中加入少量添加劑(如離子對試劑)則需要相當長的時間來平衡色譜柱。

固定相穩定性


固定相是否穩定也是保留時間漂移原因之一,固定相的穩定性都是有限的,即使在推薦的PH範圍內(nei) 使用,固定相也會(hui) 慢慢水解。例如,矽膠基質在pH4時水解穩定性最好。水解速度與(yu) 流動相類型和配體(ti) 有關(guan) 。雙官能團配體(ti) 和三官能團配體(ti) 比單官能團配體(ti) 的鍵合相要穩定;長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定;烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。

其他矽膠基質鍵合相在高比例水溶液環境中也可以發生水解,如氨基鍵合相等。

流動相組成



流動相組成的緩慢變化也是保留時間漂移的常見原因。如流動相中易揮發組分的揮發及循環使用流動相等。流動相汙染也可能是原因之一。溶於(yu) 流動相中的少量汙染物可能慢慢富集到色譜柱上,從(cong) 而造成保留時間的漂移。建議及時更換新的流動相。

疏水坍塌


當反相填料色譜柱使用接近100%的水為(wei) 流動相時,有時會(hui) 發生分離突然喪(sang) 失及被分析物質保留明顯降低或wan全不保留的現象,這就是疏水坍塌。此現象是由流動相不浸潤固定相表麵而致。當色譜柱出現疏水坍塌也是保留時間漂移的常見原因。常規的C18柱已經可以在95%左右的水相環境下正常使用而不發生疏水塌陷現象。純水中使用,則建議使用經過修飾改性的專(zhuan) 用耐水柱進行實驗(例如月旭的Ultimate® AQ-C18)。

色譜柱汙染

保留時間漂移的另一個(ge) 常見原因是色譜柱汙染。如方法已經建立,在開始時沒問題,在使用一段時間後出現這個(ge) 問題,可能是由於(yu) 色譜柱汙染引起的。這時需要對色譜柱加強衝(chong) 洗,即使用比方法流動相更強的溶劑衝(chong) 洗色譜柱。也可以在檢測樣品基質比較髒時提前加保護柱。

其他因素

如果泵或者管路中有氣泡,保留時間會(hui) 前後漂移,可通過排氣等將氣泡趕出。泵單向閥中的寶石球磨損,造成流動相倒流,壓力不穩定,保留時間會(hui) 前後漂移。解決(jue) 辦法是更換部件。泵比例閥控製失靈,不同流路流動相比例不斷變化,保留時間會(hui) 前後漂移。解決(jue) 方法是更換部件。泵活塞杆密封墊老化,流動相滲漏。解決(jue) 辦法是換密封墊。在線混合器混合能力變差,不接梯度測試混合能力,並同手工配置流動相比較。

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