正相色譜，出峰漂移，月旭帶你一探究竟

正相色譜是我們(men) 色譜分離中一種常用的分離模式。其分離原理是基於(yu) 固定相的極性大於(yu) 流動相，通過吸附作用，實現不同極性物質之間的分離。正相色譜的優(you) 勢是可用於(yu) 分離反相色譜不保留或極性較強的化合物，且適用於(yu) 絕不溶於(yu) 水的物質分離。

但是正相色譜也有困擾我們(men) 的難題。經常會(hui) 有老師在使用正相色譜柱時出現出峰保留時間漂移的情況，有些是使用的正相柱子，樣品出峰不斷地有前移的趨勢，有些是新買(mai) 的正相柱子分離樣品保留時間和原有的舊柱子不一致等。

這到底是怎麽(me) 回事呢，出現這類保留時間漂移的問題又該如何解決(jue) 呢？今天小旭就帶大家一探究竟。

➱ 定義(yi) ：

固定相的極性大於(yu) 流動相，基於(yu) 固液吸附的原理，分離不同極性的樣品。

➱ 洗脫順序：

極性低的物質先被洗脫出來。流動相的極性越強，洗脫能力也越強。

➱ 常見的正相色譜柱有：

矽膠柱，二醇基柱，氨基柱，氰基柱。

➱ 常用的流動相：

主要試劑：烷烴（戊烷，己烷，庚烷，辛烷），芳香烴（苯，甲苯，二甲苯），二氯甲烷，四氯化碳。

輔助試劑：甲基-t-丁基醚（MTBE），yi醚，四氫呋喃（THF），乙酸乙酯，乙腈，丙酮等。

正相色譜的優(you) 勢是可用於(yu) 分離反相色譜中不保留或極性較強的化合物，且適用於(yu) 絕不溶於(yu) 水的物質分離，還可用於(yu) 拆分異構體(ti) 。但正相色譜中，卻易出現保留時間漂移的情況。這究竟是什麽(me) 原因呢？

原來正相色譜柱的固定相，特別是矽膠柱中未改性的裸矽膠，其中的矽醇基的極性特別強，其對流動相中甚至是實驗環境中的水分含量非常敏感。而由於(yu) 正相色譜中固定相的水分含量常常是個(ge) 影響選擇性的關(guan) 鍵參數，流動相中的水分含量通常影響保留時間和分離度。我們(men) 知道大部分溶劑都含有小部分的溶解水，比如正己烷在20℃下，其水分含量是0.0111%w/w。因此正相色譜中出現保留時間波動較大的問題，大多可歸因於(yu) 固定相或流動相中水分含量的變化，而填料可能還是完好的。

那麽(me) 正相色譜中，出現這種固定相或者流動相中的水分含量影響物質保留時間的問題，該如何解決(jue) 呢？

小旭給大家分享兩(liang) 個(ge) 解決(jue) 方法：

1、去除固定相上的水分

用含2.5%二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5%冰醋酸的正己烷衝(chong) 洗色譜柱30個(ge) 柱體(ti) 積；

2、使用水分含量可控的流動相（比如：用水半飽和）

半飽和流動相配置方式：將無水的非極性流動相分成兩(liang) 半；其中一半中加入一定量水，並混勻攪拌約一小時，靜置分層後，將多餘(yu) 的水相全部除去；將兩(liang) 部分非極性流動相重新混合在一起就配成了“半飽和"流動相。

➱ 售後案例背景

客戶新買(mai) 的Topsil^®（拓譜）Silica矽膠柱，在做一個(ge) 老項目時，目標化合物的保留時間出現了漂移。同時對比舊柱子上目標化合物的保留時間是在10min左右，而新柱子的目標化合物的保留時間卻出現在了20min左右。

色譜條件：

色譜柱：月旭Topsil^® Silica（4.6×250mm，5μm)。

流動相：乙酸乙酯/正己烷/甲醇/正丙醇=60/40/2/1；

檢測波長：256nm；

柱溫：30℃；

流速：1.0mL/min；

進樣量：100μL。