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液相色譜方法開發中紫外吸收波長的選擇
更新時間:2022-12-12 點擊次數:3378
液相色譜方法開發過程中,樣品的紫外吸收波長對開發結果具有舉足輕重的影響。對於許多樣品而言,隻有仔細選擇合適的檢測波長,才能得到良好的分離效果。選擇波長時需了解各樣品組分的UV光譜,若能取得被測物的標準品,可較快獲得各樣品組分的UV圖譜,應用DAD還可獲得大量的其他補充信息。
選擇吸收波長一般包含(不限於(yu) )
以下幾種考慮
1、不光考慮目標物的最大吸收波長,同時要考慮樣品幹擾物吸收值最小的波長。
2、飽和烴類以及其氨基或氰基衍生物是僅(jin) 有的一類wan全不適合UV檢測的有機化合物。
3、被特定基團(-O-、-OH、-Cl、-COOH、-COOR)取代的飽和烴類具有臨(lin) 界吸收值,可能需在短波長處(185-210nm)檢測。
4、除上述幾類化合物外,一般化合物都能在較長波長(>210nm)檢測。下表列出各種官能團的最大波長與(yu) 摩爾吸收係數。
一些常用官能團的最大吸收波長與(yu) 摩爾吸收係數
5、流動相組分的紫外本底吸收。此項考慮涉及到溶劑的種類選擇、流動相pH選擇以及流動相緩衝(chong) 鹽選擇等。有些酸有紫外本底,如甲酸,乙酸;有些沒有,如磷酸。這樣,在使用較低波長檢測的方法時,就要考慮使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波長檢測下應該慎用。水在180nm以上實際無吸收,可忽略其影響。正相色譜所用溶劑的吸收度通常更強,所以一般需在長波長檢測。
反相流動相組分的UV吸收值與(yu) 波長的關(guan) 係
正相溶劑的UV吸收值與(yu) 波長的關(guan) 係
6、最大吸收波長λmax與(yu) 化學結構的關(guan) 係。紫外光譜提供了分子中生色團和助色團的信息,目前雖不能精確計算紫外特征吸收峰,但已總結出各種經驗規則。最早提出的Woodward(伍德沃德)和Fieser(費塞爾)規則可用來估算二烯烴,多烯烴及共軛烯酮類化合物的最大紫外吸收波長。
多烯烴類與(yu) α,β-不飽和酮類紫外吸收的經驗規則

參考資料:
1. 實用高效液相色譜法的建立[美]L.R.森德爾 J.J.柯克蘭(lan) J.L.格萊吉克 著.張玉奎 王傑 張維冰 譯.
2. 基礎有機化學(第三版).刑其毅 裴偉(wei) 偉(wei) 徐瑞秋 裴堅.