星空体育全站的再生方法，升級版本

被常規樣品汙染的矽膠基質反相色譜柱，已有各種清洗與(yu) 再生方法。月旭科技在對普通常規反相柱子的異常衝(chong) 洗中，一般建議客戶用甲醇-乙腈-異丙醇-乙腈各項衝(chong) 洗20倍柱體(ti) 積的方法進行衝(chong) 洗。

市麵上也有些公司推薦使用一些更強溶劑的洗脫方式。如用二氯甲烷：甲醇（96:4，V/V），加1%氫氧化銨衝(chong) 洗，其中加入的氫氧化銨對聚集在柱頭的汙染物具有良好的清洗效果。再如，在用水衝(chong) 洗色譜柱同時進4等份的200μL二氯甲碸，然後依次用甲醇、氯仿和甲醇衝(chong) 洗。用N，N-二甲基甲酰胺、丙酮依次衝(chong) 洗色譜柱。這些方法耗時短，但使用的特殊溶劑，如氫氧化銨、二氯甲碸、N，N-二甲基甲酰胺等，均對色譜固定相有一定的損傷(shang) 。

2、金屬離子汙染色譜柱的清洗

當色譜柱被金屬離子汙染後，一般的清洗方法無法生效，需要用特殊的清洗方法。磷酸和0.1mol/L檸檬酸對色譜柱上吸附的金屬離子具有較好的清洗效果，因此常被人們(men) 用來清洗被金屬離子汙染的色譜柱^[1]乙二胺四乙酸（EDTA）能同許多金屬離子形成配合物，0.05mol/L的EDTA水溶液也可以用來去除色譜柱中金屬離子汙染物。

這些試劑雖然能去除金屬汙染物，但也存在一些缺陷，如水溶液對固定相的浸潤性較差，清洗效果不太理想；磷酸對固定相上鍵合相有一定的破壞作用；EDTA帶入鈉離子，對固定相性能產(chan) 生影響。

3、蛋白質汙染色譜柱的清洗

蛋白質分子量大，同時具有親(qin) 水和疏水特性，對很多物理和化學因素敏感。一般情況下，純有機溶劑如乙腈或甲醇不能很好溶解多肽和蛋白質，不能有效地清洗色譜柱，因而需要一些特殊的清洗方法。

現常用方法是用不含緩衝(chong) 鹽的流動相-0.1%TFA（三氟yi酸）水溶液-乙腈：異丙醇（1:2，V/V，含0.1%TFA）各項衝(chong) 洗20倍柱體(ti) 積，或用0.1%TFA（三氟yi酸）：乙腈（1:1，V/V）用0.2mL/min流速，過夜衝(chong) 洗色譜柱。

當上述方法無效時，可使用一些苛刻的試劑，如鹽酸胍、二甲基甲酰胺及表麵活性劑等。如用50%異丙醇水溶液衝(chong) 洗時，將6mol/L鹽酸胍水溶液與(yu) 異丙醇按1:1混合，進樣250μL；或者用30%二甲基甲酰胺水溶液清洗，時間不超過30min，處理後反複用水、甲醇衝(chong) 洗。在常規流動相衝(chong) 洗色譜柱時，注射500μL的1%十二烷基硫酸鈉（SDS），然後用5%~95%乙腈水（含0.1%TFA）梯度衝(chong) 洗，去除蛋白汙染物效果也較好。^[2]若已確定蛋白質汙染種類，可將對應蛋白水解酶（如1%胰蛋白酶或木瓜蛋白酶）注入色譜柱，將蛋白質水解為(wei) 肽，再用鹽溶液洗脫。

蛋白質汙染色譜柱，不論是用高濃度的磷酸鹽溶液，還是用尿素或胍來清洗色譜柱，對色譜柱都會(hui) 產(chan) 生較大損傷(shang) ，同時損害色譜儀(yi) 器。其中使用注射1%SDS法清洗色譜柱，不僅(jin) 節省時間，還能得到較好的效果，是現有清洗方法中較優(you) 的選擇。

離子交換色譜柱在ji端pH範圍和高鹽濃度條件下長時間使用，或者分析蛋白等生物類樣品後，鹽離子及蛋白質會(hui) 吸附於(yu) 固定相表麵，導致色譜柱分離能力下降，柱壓升高，峰形變差。

對於(yu) 汙染的離子交換色譜柱，月旭科技的Ultimate^® XB-SCX和Ultimate^® XB-SAX建議用不含有緩衝(chong) 鹽的流動相-10%甲醇衝(chong) 洗20倍柱體(ti) 積。

若常規的方法無法改善色譜柱性能的，可根據色譜柱性質及具體(ti) 汙染情況，選擇強酸性或強堿性溶液、高鹽溶液、含有機溶劑的緩衝(chong) 溶液、含尿素等溶劑或表麵活性劑（非離子型表麵活性劑）的緩衝(chong) 鹽溶液、某些蛋白質變性劑（如鹽酸胍和尿素等）以及蛋白酶中一種或幾種組合進行清洗和再生。

體(ti) 積排阻色譜是基於(yu) 分子尺寸大小將物質分離的一種色譜模式。

月旭Xtimate^® SEC的柱子，日常的衝(chong) 洗建議用10%乙腈或5%乙腈-90%乙腈衝(chong) 洗20倍柱體(ti) 積。但當多次使用後，某些樣品可能會(hui) 吸附到入口篩板或填料上。當積累至一定程度時會(hui) 出現壓力升高並伴隨峰形展寬的異常現象，需要進行特殊的衝(chong) 洗。該衝(chong) 洗的清洗溶液選擇的基本原則：1）低pH的鹽溶液有助於(yu) 移除堿性蛋白；2）有機溶劑有助於(yu) 移除疏水蛋白；3）助溶劑有助於(yu) 去除在固定相上強吸附的物質（如通過氫鍵作用等）。

注意：隻有在中性鹽溶液或有機溶劑沒有明顯改善效果的情況下，使用助溶劑（如：6-8M的尿素或0.2-0.3%十二烷基硫酸鈉）。

參考文獻

[1] 張玉奎，張維冰，鄒漢法. 分析化學手冊(ce) [M].第6分冊(ce) .液相色譜分析。北京：化學工業(ye) 出版社，2000.

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