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色譜柱填料板結原因剖析及解決方案
更新時間:2022-10-28 點擊次數:1335
在色譜柱使用過程中,會(hui) 出現柱壓高,峰形差等現象,其主要原因是色譜柱填料汙染導致的,其中填料板結是填料汙染中特殊的一種,下麵將對色譜柱填料板結進行原因剖析及解決(jue) 方案。
色譜柱填料板結,色譜柱打開後會(hui) 發現,填料顏色不變,但填料成片狀、塊狀、結晶等結塊現象。
1)不管是新色譜柱或已經使用過的色譜柱,使用含鹽的流動相都先使用與(yu) 流動相組成比例相同但不含鹽的溶液進行衝(chong) 洗置換(避免使用純水),時間建議30個(ge) 柱體(ti) 積以上。
2)流動相置換,在方法開發過程中,多數情況會(hui) 涉及不同緩衝(chong) 鹽體(ti) 係和不同有機相體(ti) 係的各種嚐試,那麽(me) 在調整、更換流動相組成的過程中,請務必充分考慮到不同種類緩衝(chong) 鹽的溶解情況。若不確定所使用的緩衝(chong) 鹽和有機相之間的互溶情況,可按照不同比例將二者混合,靜置30min,觀察底部是否有沉澱或絮狀物產(chan) 生。
3)梯度條件,當涉及緩衝(chong) 鹽-有機相梯度條件時,請確認緩衝(chong) 鹽在梯度條件中有機相最高點是否能夠充分溶解。當然,不確定的時候也可以和上述方法一樣,將緩衝(chong) 鹽和有機相按照梯度最高比例混合後靜置,觀察是否有沉澱產(chan) 生。
2、流動相配製時間過久,流動相長菌,或乙腈等有機相時間過久產(chan) 生絮狀沉澱。
解決(jue) 方案:流動相按需配製,純水相流動相一次配製使用不超過12小時。其他含有機相流動相一次使用不超過24小時,也可根據實際情況調整流動相的保質期。
3、其他:如膠狀,絮狀等樣品通過過濾無法去除,也會(hui) 積壓在篩板和柱頭端,引起柱壓升高。
解決(jue) 方案:膠狀,絮狀樣品通過工藝,前處理去除幹淨後再進液相色譜係統。