HPLC方法開發緩衝鹽的選擇

水相流動相的使用，是采用反相色譜法進行離子化合物分析檢測的關(guan) 鍵步驟：包括pH值對分析物保留的影響、緩衝(chong) 鹽的類型與(yu) 濃度、緩衝(chong) 鹽在有機溶劑中的溶解度及其對檢測的影響等。緩衝(chong) 鹽種類、離子強度和pH值等選擇不當，會(hui) 導致對極性化合物和可電離化合物進行反相分離時，存在不良或不可重現的保留和拖尾現象。

分析物部分離子化，分析物與(yu) 固定相自由矽醇基和其他活性位點之間較強的作用力等問題，可通過選擇合適的緩衝(chong) 範圍、正確的緩衝(chong) 鹽種類及其濃度（離子強度）來改善。靈敏的LC-MS分析，更加注重酸、堿、緩衝(chong) 鹽種類和其他添加劑的選擇：緩衝(chong) 液不能抑製分析物的電離。

反相模式中，離子化合物的保留主要由流動相pH值來決(jue) 定。離子官能團的解離性能同樣影響化合物的保留。非離子化合物的保留幾乎不受流動相pH值的影響。對於(yu) 含酸性基團的化合物（羧酸鹽居多），pH值低於(yu) 化合物pKa可增強保留，對於(yu) 含堿性基團的化合物（胺類居多），pH值高於(yu) 化合物pKa可增強保留。

在pH值離pka較遠的位置，較小的pH值變化對非質子-質子種類的比例影響很小。因此，中等pH值變化不會(hui) 對保留產(chan) 生明顯影響。pKa附近pH值的微小變化，會(hui) 對兩(liang) 種物質的比例產(chan) 生明顯的影響。因此，改變接近pKa的pH值，會(hui) 明顯影響化合物的保留。當pH值作為(wei) 增加化合物保留的手段時，考慮方向應該是盡量降低分析物的離子化。緩衝(chong) 液是弱酸與(yu) 其共軛堿，或弱堿與(yu) 其共軛酸的溶液。

緩衝(chong) 液降低氫離子、水合氫離子和氫氧根離子的影響，從(cong) 而較少包括稀釋在內(nei) 的pH值波動。反相模式下，經典的矽膠基質填料的pH值耐受範圍是2-8。緩衝(chong) 液的選擇通常由所需的pH值決(jue) 定。緩衝(chong) 液的pKa必須接近所需的pH值，因其在pKa處最容易控製pH值。經驗法則是選擇一個(ge) pKa值<2個(ge) 單位的所需流動相pH的緩衝(chong) 液。

緩衝(chong) 鹽應用一般思路