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021-50276769所謂藥典方法，顧名思義(yi) ，藥典專(zhuan) 論所收載的方法。在參考藥典方法進行色譜分析與(yu) 方法開發過程中，因實驗室條件不同導致*按照藥典方法無法進行可靠的分析。我們(men) 應了解到：藥典方法考慮到各個(ge) 實驗室的差異，有一定的可調範圍。
下麵我們(men) 具體(ti) 來探討一下這個(ge) 問題吧!
01
中國藥典2020規定
0512高效液相色譜法規定如下：
品種正文項下規定的色譜條件（參數）除填充劑種類、流動相組分、檢測器類型不得改變外，其餘(yu) 如色譜柱內(nei) 徑與(yu) 長度、填充劑粒徑、流動相流速、流動相組分比例、柱溫、進樣量、檢測器靈敏度等，均可適當改變，以達到係統適用性試驗的要求。
調整流動相組分比例時：
當小比例組分的百分比例X小於(yu) 33%時，允許改變範圍為(wei) 0.7X〜1.3X；
當X大於(yu) 33%時，允許改變範圍為(wei) X—10%〜X+10%。
由上文可知，中國藥典專(zhuan) 論方法除填充劑種類、流動相組分（比例調整在規定範圍內(nei) ）、檢測器類型不得改變外，其他條件改變了，還是認為(wei) 是藥典方法。
但中國藥典沒有規定方法確認之說，所以，即使是中國藥典方法，也是應該按分析方法驗證的相關(guan) 規定進行全套的方法驗證。
02
美國藥典規定
USP43<621>CHROMATOGRAPHY規定如下：
為(wei) 符合係統適用性的要求而調整的操作條件是允許的，除非專(zhuan) 論項下另有規定。下述為(wei) 所列的最大的可調範圍，應該按分析方法驗證的相關(guan) 規定進行全套的方法驗證。多條件的調整，將對係統性能產(chan) 生累積影響，實施前需仔細考慮。
01
流動相緩衝(chong) 液的pH（HPLC）：±0.2單位以內(nei) 或規定範圍以內(nei) 調節，適用梯度及等度。
02
流動相緩衝(chong) 液鹽濃度（HPLC）：±10%（pH允許情況下），適用梯度及等度。
03
流動相中組分比例（HPLC）：組分比例≤50%的組分可以相對調節±30%，但是任意一組分比例的調節不應超過±10%（相對於(yu) 總的流動相），含三組分的流動相的調節可以分組分進行，含雙組分的流動相的調節可在最小的組分進行。
雙組分調節實例：例如流動相50：50，其中一組分50%的30%是15%，但是它超過了占總體(ti) 比例±10%的規定，所以這個(ge) 流動相比例的調節範圍應以±10%為(wei) 限，可以在不超過40：60~60：40的範圍之間調節。再例如流動相比例為(wei) 2:98，其中小組分2%的30%是0.6%，這個(ge) 值不超過占總體(ti) 比例±10%的規定，此流動相的比例可以在不超過1.4：98.6~2.6：97.4的範圍之間調節。
三組分調節實例：流動相60：35：5，它的次組分35%的30%是10.5%，但是它超過了占總體(ti) 比例±10%的規定，所以這個(ge) 流動相比例中的次組分的調節範圍應以±10%為(wei) 限。對於(yu) 最小組分5%的30%是1.5%。可以在不超過50：45：5~70：25：5或58.5：35：6.5~61.5：35：3.5的範圍之間調節。
04
紫外檢測器的波長（HPLC）：專(zhuan) 論中規定的檢測波長不允許改變，檢測器供應商的程序或另一個(ge) 驗證程序來說明，波長檢測誤差，最多不得超過±3nm。
05
固定相：
色譜柱長度（GC）：可以在±70%範圍內(nei) 調節。
色譜柱長度（HPLC）：見粒徑項下。
色譜柱內(nei) 徑（HPLC）：如果線速度保持恒定，可以調整。見HPLC流速。
色譜柱內(nei) 徑（GC）：最大可調整至±50%。
膜厚（毛細管柱GC）：最大可在−50%至100%調整。
06
粒徑(HPLC)：等度洗脫：粒徑和柱長均可以修改，但柱長（L）與(yu) 粒徑（dp）的比值（L/dp）恒定或在規定柱長與(yu) 粒徑的比值的-25%~+50%範圍內(nei) 。或者（對於(yu) 將粒度調節應用於(yu) 表麵多孔顆粒時），其它柱長（L）和粒度（dp）的柱子可以使用，但理論塔板數（N）應在規定柱的-25%~+50%範圍內(nei) 。如果調節導致更高的理論塔板數時應注意，這樣將產(chan) 生更小的峰體(ti) 積，應通過縮小額外柱外峰拓寬的因素調整，例如儀(yi) 器的管路、檢測池的體(ti) 積、采樣速率和進樣體(ti) 積。當專(zhuan) 論中未規定粒度時，該比值應采用規定柱的最大粒度計算。
粒徑(GC)：如果色譜圖的符合係統適用性要求以及粒徑範圍比相同，粒度大小可以從(cong) 大變小或從(cong) 小變大，粒徑範圍比的定義(yi) 是最大粒度直徑除以最小粒度直徑。
07
流速（GC）：流速可以最大在±50%調整。
流速(HPLC)：當粒度改變時，流速也許需要調整，因為(wei) 為(wei) 達到相同的性能，小粒度的柱子需要更高的線速度（測量通過較少塔板高度），流速、柱內(nei) 徑、粒度通過下麵公式換算。
F2=F1×[（dc22×dp1）/（dc12×dp2）]
對於(yu) 等度洗脫，如果粒度從(cong) ≥3μm變化到＜3μm時，將增加線速度（通過調整流速），使柱效不下跌20%以上，相同地，如果粒度從(cong) ＜3μm變化到≥3μm時，應減少線速度（流速）來避免柱效降低20%以上。梯度洗脫時，流速、柱內(nei) 徑、粒度將不允許調整。另外，流速可以在±50%調整（隻適用於(yu) 等度洗脫）。
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