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案例分享 | 帶你了解多肽的分離

更新時間:2022-09-14 點擊次數:1574

01 多肽的性質

多肽由多個(ge) 氨基酸依次連接而成的化合物,氨基酸是兩(liang) 性化合物,具有兩(liang) 性離子的特性。


02 影響多肽分離的因素

1

色譜柱填料孔徑(120Å、300Å)

2

添加劑及濃度(甲酸、離子對試劑)

3

pH

4

洗脫溶劑(乙腈、甲醇、異丙醇)

5

梯度

6

溫度

7

流速

孔徑是指矽膠球上小孔的直徑。分子進入小孔,在小孔內(nei) 被鍵合的烷基吸附,達到分離的效果。孔徑小,含孔率高,比表麵積大,載碳量高。分子在孔內(nei) 分離,孔徑大小必須和分子大小相匹配,分子必須能進入孔內(nei) ,一般小分子使用80-120Å,大分子通常使用300Å,為(wei) 了達到最佳分離,一般要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上。

低pH減少了酸性側(ce) 鏈的解離,離子對試劑(比如三氟yi酸)與(yu) 肽鏈堿性側(ce) 鏈作用,中和其電性,電荷的減少使多肽的疏水作用增強,堿性多肽側(ce) 鏈與(yu) 矽醇基無法產(chan) 生吸附,但離子對試劑會(hui) 使得MS的離子化效率降低。Mid-Autumn Festival


03 項目案例 

液相上的分離:

色譜柱:月旭UItimate® XB-C18(2.1×100mm,5μm 300Å)。

流動相:梯度 A(0.1%三氟yi酸) B(0.1%甲酸乙腈);

柱溫:40℃;

紫外檢測器:220nm;

流速:0.3mL/min;

進樣量:5μL。

微信截圖_20220914100538.png

討論:

多肽化合物分子量大約為(wei) 2000,選擇120Å孔徑和300Å孔徑均可以達到有效保留,在實驗過程中發現120Å的峰形差,分析可能是該物質在這個(ge) 體(ti) 係中的分子體(ti) 積較大,故在300Å的柱子上峰形有了明顯的改善。可見分子量可以用於(yu) 選擇填料孔徑的參考,但不是絕對的,做多肽時建議常規孔徑120Å和大孔徑300Å的色譜柱都做一下嚐試,選擇更合適的孔徑;

流動相中使用甲酸為(wei) 添加劑時沒有保留,選擇具有離子對作用的三氟yi酸時保留良好,該體(ti) 係是檢測多肽時的常規shou選體(ti) 係,再根據該體(ti) 係下的結果進行調整。


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