抽絲剝繭探案三：難以捉摸的保留時間漂移

先來看看備案筆錄：

User：老師，發現主峰每一針都向後移動半分鍾。

Engineer：隻有保留時間移動？峰型和柱效有變化嗎？

User：沒有，用了一個(ge) 星期，峰已經從(cong) 5分鍾漂到10分鍾了。

Engineer：手動混勻走單泵還是雙泵用的混合器走樣？

User：單泵……

客戶做某單糖衍生成鹽的物質A，色譜條件：

色譜柱：氨基柱，4.6×250mm，5μm。

柱溫：35℃；

流動相A：乙腈，流動相B：硫酸緩衝(chong) 溶液（取磷酸氫二鉀7.0g，用2000mL水溶解，加氨水0.5mL，用磷酸調節pH至7.5）；流動相比例：流動相A：流動相B=75：25；

流速：1.5mL/min；

紫外檢測波長：195nm；

進樣體(ti) 積：20μL。

樣品由1：1乙腈水溶解製得。

客戶小姐姐在實驗過程中發現在一個(ge) 序列中保留時間有規律的後延，客戶講述峰形沒有太大變化，峰麵積RSD也還好，換過不同的實驗人員多次重新配置了流動相，均存在這個(ge) 問題，色譜圖如下：

漂移色譜圖

漂移重疊的色譜圖

這裏要特別指出，用戶小姐姐用的色譜柱和色譜儀(yi) 不是月旭品牌的，僅(jin) 僅(jin) 是基於(yu) 用戶小姐姐對我們(men) 月旭工程師的信任，向我們(men) 的銷售工程師尋求指導幫助，我們(men) 都是做好事不留名的月旭人。

我們(men) 先來羅列一些導致保留時間漂移的原因，再結合用戶的色譜圖來分析一下。

導致保留時間漂移的可能原因及解決(jue) 辦法：

1、色譜柱原因：

1）柱子沒有達到平衡

解決(jue) 辦法：延長平衡時間。

2）色譜柱汙染或鍵合相流失

解決(jue) 辦法：更換新柱。

2、儀(yi) 器原因：

1）柱溫箱溫度變化

解決(jue) 辦法：保持室溫恒定，柱溫設定正確且恒定。

2）儀(yi) 器原因導致的流動相比例變化，如混合器，比例閥出現故障。

解決(jue) 辦法：排查儀(yi) 器流速恒定，檢查比例閥及混合器是否正常。

3、流動相配置原因

解決(jue) 辦法：重新配置流動相，確保配置比例準確，對於(yu) 易揮發的正相體(ti) 係可使用安全瓶蓋防止揮發；在使用緩衝(chong) 鹽的體(ti) 係保證緩衝(chong) 鹽沒有沉澱或析出，pH恒定。 

4、係統漏液

解決(jue) 辦法：排查係統的各接口處是否漏液，觀察壓力波動情況以及壓力線。如有漏液應重新連接管路擰緊。 

5、樣品自身原因，如樣品降解，保留時間發生變化

解決(jue) 辦法：研究更利於(yu) 樣品穩定的流動相及溶劑體(ti) 係。

1、重配流動相

2、排查儀(yi) 器

3、排查柱子

如此有規律的變化，考慮儀(yi) 器的原因比較大。我們(men) 依據用戶的陳述來判斷一下：

首先用戶說柱溫箱溫度設定沒問題而且溫度恒定，我們(men) 排除這個(ge) 原因。

其次小姐姐說他們(men) 是等度而且是預混合之後才上機的，並且多人多次配置，這樣基本可以排除流動相的問題。

第三，針對色譜柱的問題客戶強調他們(men) 延長了平衡時間，而且分不同工作日跑了幾次序列均存在這個(ge) 問題，故可以排除色譜柱的問題，最後隻剩下儀(yi) 器的問題了，由於(yu) 用戶沒有時間慢慢排查，換了一台儀(yi) 器，保留時間漂移的問題沒有再出現，至此謎底解開了。

Engineer: 老師您好，換了儀(yi) 器之後，問題有改善嗎？

User: 昨天換了兩(liang) 台儀(yi) 器，有一台儀(yi) 器跑出來的時間漂移不明顯，可以接受！

Engineer: 這根柱子比較特殊，現在漂移情況如何？

User: 嗯嗯，做了一天下來，漂移不到1分鍾。

Engineer: 太好了！

征求用戶同意我們(men) 編輯了本文，分享給更多的用戶小夥(huo) 伴，當實驗過程中遇到保留時間漂移的情況時莫慌，我們(men) 可以逐一排查儀(yi) 器、色譜柱、流動相、樣品等因素，色譜圖是以上各部分綜合作用產(chan) 生的結果，我們(men) 隻要耐心一一排查就可以找出問題所在。