藥物研究中⼿性分離分析⽅法及技巧

⼿性分析很關(guan) 鍵的⼀項是流動相的選擇，⼿性分析⼀般都采⽤正相，使⽤最多的流動相是正⼰烷、正庚烷、⼄醇和異丙醇這四種，其中起洗脫作⽤的流動相是⼄醇和異丙醇，正⼰烷和正庚烷⽤來調節流動相的洗脫強度。正⼰烷和正庚烷對於(yu) 樣品分離沒有什麽(me) 太⼤的影響，不會(hui) 改變選擇性和分離度，通常都可以混⽤，不過正庚烷⽐正⼰烷對⼈體(ti) 的傷(shang) 害要⼩很多，但價(jia) 格是後者的⼀倍，所以歐美的很多⼤製藥公司多使⽤正庚烷，⽽國內(nei) 多使⽤正⼰烷。

⼄醇和異丙醇對樣品的分離起關(guan) 鍵的作⽤，不同的醇有不同的選擇性，改變醇的種類可以改變選擇性，常⽤的醇類是⼄醇和異丙醇，甲醇不能使⽤是因為(wei) 它和正⼰烷、正庚烷不互溶，叔丁醇粘度太⼤，⼀般作為(wei) 添加劑配合⼄醇或者異丙醇少量使⽤，提供特殊的選擇性，通常能起到意想不到的效果。

流動相⾥經常需要添加酸或者是堿來調節峰形，常⽤的酸有三氟⼄酸、⼄酸和甲基磺酸，堿⼀般是⼆⼄胺和三⼄胺，也有⽤⼄醇胺和異丁胺的，流動相⾥添加酸和堿的濃度⼀般要求控製在0.2%（體(ti) 積⽐）以下，使⽤的原則⼀般是酸性樣品加酸，堿性樣品加堿，但實際上很多樣品是即含酸性基團⼜含堿性基團，這就要看哪個(ge) 基團作⽤強了，對於(yu) 某些含氨基的兩(liang) 性樣品，例如苯⽢氨酸，甲基磺酸是⼀個(ge) ⾮常好的選擇，磺酸基能夠抑製氨基的堿性，⼜能提供⼀個(ge) 酸性的流動相環境，使樣品既能得到很好的分離⼜能獲得對稱的峰形。

⼀般做純度分析檢測雜質含量時我們(men) 要求盡量的采⽤低波長來讓盡可能多的雜質有紫外吸收，⽽做⼿性分析時我們(men) 需要采⽤盡可能⾼的波長來去除在低波長下才有吸收的雜質的⼲擾，⼀般原則還是盡量選擇樣品紫外吸收zui 好的地⽅來獲得較⾼的靈敏度，但流動相⾥添加⼆⼄胺會(hui) 導致在低波長下基線波動變⼤，係統難以平衡，這種情況下⼀般要提⾼檢測波長，實際操作過程中有些樣品在⾼波長下吸收⾮常差，隻能⽤低波長檢測，這樣的樣品可以嚐試在樣品稀釋的時候加⼊過量的⼆⼄胺（但不宜太多），⽽流動相⽤中性，從(cong) ⽽獲得滿意的分析結果。

有些樣品隻添加堿或者酸效果不好，可以嚐試在樣品⾥同時添加酸或者堿，這樣的樣品我曾經遇到過，隻添加酸或堿樣品都拖尾，不能達到基線分離，這種情況下通過酸堿同時加⼊，最後獲得了⾮常漂亮的峰形和良好的分離度。實際操作中有些樣品堿性太強，進樣以後根本不成峰，低波長下細看似乎能感覺到基線⼀直在漂，開始時懷疑樣品濃度不夠，加⼤樣品濃度以後仍看不到樣品峰，流動相加⼊⼆⼄胺或三⼄胺以後再進樣，流動相⾥添加酸或者堿以後，基本上不會(hui) 提供額外的選擇性，但是卻能提⾼分離度。