凝膠過濾層析中的重要參數

凝膠過濾層析是利用具有多孔網狀結構的凝膠顆粒的分子篩作用，根據被分離樣品中各組分分子量大小的差異進行洗脫分離的一項技術。今天主要為(wei) 大家介紹一下凝膠過濾層析中的一些重要參數。

#1 凝膠顆粒大小

指不能進入凝膠顆粒內(nei) 部孔隙的最小分子的分子量。排阻極限反應某種凝膠能有效分離的最大分子量，所有大於(yu) 排阻極限的分子均被*排阻，不能分離。如Tandex G25的排阻極限為(wei) 5000Da，它表明分子量大於(yu) 5000Da的分子為(wei) 全排阻。

所能進入凝膠內(nei) 部孔隙的最大分子和最小分子的分子量範圍。它表示一種凝膠適用的分離範圍，如Tandex G25對球形蛋白的分級分離範圍為(wei) 1000-5000Da，它表示通過Tandex G25可有效分離分子量在這個(ge) 範圍內(nei) 的球形蛋白。

柱內(nei) 凝膠顆粒之間的空隙體(ti) 積的總和，用V_o表示。

幹膠溶脹後顆粒本身所固有的體(ti) 積，用V_g表示。

凝膠顆粒內(nei) 部孔隙體(ti) 積的總和，或者為(wei) 小分子溶質可滲透進入凝膠內(nei) 部體(ti) 積的總和，又稱固定相體(ti) 積，用V_i表示。

凝膠柱裝成後從(cong) 柱底板到凝膠沉積層表麵的總體(ti) 積，又稱床體(ti) 積，用V_t表示。

式中，K_d是分配係數；V_e一般介於(yu) V_o和V_o+V_i之間。對於(yu) *排阻的大分子，由於(yu) 其不進入凝膠內(nei) 部，隻能在顆粒間隙中流動，故其洗脫體(ti) 積V_e=V_o；而對於(yu) *滲透的小分子，由於(yu) 它可在整個(ge) 凝膠柱內(nei) 流動（忽略V_g），故其洗脫體(ti) 積V_e=V_o+V_i；分子量介於(yu) 兩(liang) 者之間的分子，它們(men) 的洗脫體(ti) 積也介於(yu) 兩(liang) 者之間；一些吸附蛋白在最後洗出。