色譜雙峰大排查

色譜雙峰指的是同一種物質，在色譜圖中表現出雙峰，讓我們(men) 誤以為(wei) 是兩(liang) 種物質。那為(wei) 什麽(me) 會(hui) 出現這種情況，在實驗過程中又該怎麽(me) 避免，今天小編就和大家一起來聊一聊。

在HPLC分析中，在色譜柱正常、樣品濃度適宜、分析方法合適、色譜峰在出峰時間較短的情況下，峰形應是一個(ge) 高斯峰型，對稱而尖銳的。然而在實際操作中，如果對樣品性質不了解，前處理不恰當或者分析方法不合理時，就會(hui) 出現峰形不正常的情況，其中雙峰現象是液相色譜常見的問題之一。出現色譜雙峰的原因一般有以下幾種：

如果在分析樣品時發現每個(ge) 色譜峰都是雙峰，尤其是分析單一純物質時，則可以確定是色譜柱出現問題了，一般是柱頭受損引起的。如果進樣量少，原來色譜峰正常，峰形多為(wei) 一大峰帶一小峰，不一定拖尾時，應考慮是柱頭端被堵塞，可以將色譜柱反接（月旭的色譜柱可以反衝(chong) ），用流動相或酸或其他有機溶劑衝(chong) 洗，將堵在柱頭端的物質衝(chong) 掉後，再正接測試，通常會(hui) 有改善。當然也可以不反衝(chong) ，正衝(chong) 有時也有效果。

如果雙峰強弱相差不大，柱頭端填料變髒或柱流失的可能性更大，這時可以把柱頭擰開，將篩板取下超聲，柱頭端刮去被汙染的填料，填上新填料後再擰緊，不過這個(ge) 最好是由專(zhuan) 業(ye) 人員操作且不能經常做，否則用不了幾次，色譜柱就會(hui) 應柱效降低而報廢。如果上述操作仍不能解決(jue) 問題，則可能是柱塌陷造成的，需要更換色譜柱。

目前HPLC分析多為(wei) 反相色譜，流動相多為(wei) 甲醇、乙腈、水，加入各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與(yu) 流動相相溶的溶劑溶解，最佳的溶解方法是用流動相溶解。在實際分析中，有時候為(wei) 了樣品的溶解性或穩定性加入了一定的緩衝(chong) 液，緩衝(chong) 液的酸堿性可能會(hui) 導致樣品轉化，從(cong) 而產(chan) 生雙峰現象。此時需要更換緩衝(chong) 液，調整溶劑pH值，或者用流動相配置樣品。

此外，樣品要現配現用，避免因樣品溶解液的有機相比例、pH值發生變化而導致的溶劑效應。

當用溶劑極性強度大的試劑溶解樣品，如甲醇、乙腈、乙醇等，而分析體(ti) 係以水為(wei) 主時，如果樣品進樣量大，比如進20μL，此時目標物會(hui) 出現雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣)，且拖尾，保留時間會(hui) 提前(相對進樣量少而言)，將進樣量減少一半以上，峰型將變為(wei) 正常。這是樣品的溶劑與(yu) 流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的，這種情況下需要減少進樣量或者用流動相溶解樣品。

另一個(ge) 原因是，進樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色譜柱問題)。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由於(yu) 進樣量過大，色譜柱過載造成的。

體(ti) 係pH值對色譜雙峰的影響出現在各個(ge) 環節上，尤其在緩衝(chong) 液流動相平衡過程中其影響更為(wei) 明顯。當連續進樣時，受pH的連續變化影響會(hui) 經常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時，流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點，否則也容易引起產(chan) 生雙峰。在用離子對試劑分析時，液相條件沒選擇好也會(hui) 引起雙峰。

有些樣品由於(yu) 其化學結構的特點，存在異構體(ti) 。有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC-MS下，其質譜的總離子流圖（TIC）上較明顯，如啶蟲脒。

參比波長設置錯誤，例如設置分析波長254nm，參比波長400nm，這個(ge) 對於(yu) 大多數化合物可能沒影響。但是如果被測化合物，在400nm處也有強的紫外吸收，比254nm更高。這樣其出峰時，由於(yu) 背景的抵扣作用，本來一個(ge) 峰會(hui) 變成對稱的二個(ge) 峰，而且如果將二峰之間的峰穀反轉180度，恰好是一個(ge) 完整的峰。這時要將參比波長設置更大，或者取消。

當然，如果儀(yi) 器存在較大死體(ti) 積，也可能會(hui) 導致雙峰出現。

在對樣品不夠了解，分析方法不當，樣品處理方法及進樣方式不合理情況下，會(hui) 出現各種意想不到的問題，也很難對色譜峰作出合理的解釋，尤其對於(yu) 新手更是如此，所以，了解每種異常出現的原因，並根據原因采取合理的改進措施，是避免異常峰出現的*的辦法。