IEC緩衝液的類型

在離子交換過程中保持pH的恒定是十分重要的，正如前麵討論過的，pH的改變會(hui) 造成蛋白質帶電荷數量和分布狀況發生變化，從(cong) 而直接影響到蛋白質是否能結合在交換劑上以及結合力的強弱。因此，在離子交換色譜中流動相必須使用緩衝(chong) 液。

緩衝(chong) 液的種類很多，能夠起緩衝(chong) 作用的物質可分為(wei) 兩(liang) 類：第一類是由弱酸（或弱堿）及相應的鹽構成的係統；第二類是兼性離子化合物。對於(yu) 第一類緩衝(chong) 物質，在進行離子交換時，如果緩衝(chong) 離子所帶的電荷與(yu) 離子交換劑上的功能基團相反，將參與(yu) 離子交換過程，並可能對局部pH產(chan) 生影響，因此應盡可能采用與(yu) 功能基團帶同種電荷的緩衝(chong) 離子，即：使用陰離子交換劑時選擇帶正電荷的緩衝(chong) 離子；使用陽離子交換劑時選擇帶負電荷的緩衝(chong) 離子。

當然這也並不是絕對的，比如磷酸鹽緩衝(chong) 液也經常在陰離子交換過程中被采用，但在這種情況下應特別注意在上樣前充分平衡，確保色譜係統的pH和離子強度與(yu) 起始緩衝(chong) 液一致。第二類緩衝(chong) 物質在陰、陽離子交換中均能采用。表1和表2分別列出了陽離子交換色譜和陰離子交換色譜時常用的緩衝(chong) 液。

在離子交換過程中雖然可以除去很多雜蛋白，起到純化效果，但目的蛋白的洗脫峰中必然含有大量緩衝(chong) 物質和鹽的成分，這些成分的引入對於(yu) 目的蛋白來說本身也是一種雜質。特別在色譜後需對洗脫峰進行冷凍幹燥，以得到純蛋白樣品時，在凍幹後的粉末中往往絕大部分是緩衝(chong) 物質和鹽。如果在凍幹前進行脫鹽或透析操作，雖然可以基本除去這些雜質，但也有可能造成蛋白活性的回收率下降。此時應優(you) 先考慮采用揮發性的緩衝(chong) 物質，這樣在凍幹階段可以將這部分雜質除去，常見的揮發性緩衝(chong) 物質列於(yu) 表3。

◌ Q /SP/DEAE/CM Tanrose FF

快流速瓊脂糖基架離子交換介質

◌ Q/SP Tanrose HP 

高分辨率瓊脂糖基架離子交換介質

◌ Q/SP Tanrose XL 

高載量瓊脂糖基架離子交換介質

◌ Q/SP Tanrose BB 

大顆粒瓊脂糖基架離子交換介質

◌ DEAE/CM Tandex 

葡聚糖基架離子交換介質