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疏水層析中的蛋白洗脫

更新時間:2022-01-29 點擊次數:4422

蛋白質結合於(yu) 填料之後,必須再將目標蛋白質洗脫,並收集層析柱柱後的流出液。多數情況下,洗脫過程用於(yu) 將不需要的蛋白質從(cong) 目標蛋白質中分離或者去除。不需要的蛋白質可能與(yu) 填料結合的不是那麽(me) 緊密,因而會(hui) 先於(yu) 目標蛋白質被洗脫。另外一些情況下,不需要的蛋白質會(hui) 與(yu) 填料結合更加緊密,並會(hui) 在目標蛋白被洗脫之後仍與(yu) 填料結合。這種情況通常發生在疏水層析法(HIC)分離蛋白質多聚體(ti) 時,目標蛋白多聚體(ti) 與(yu) 填料的結合比單體(ti) 與(yu) 填料的結合更加緊密。在洗脫過程中,流出液組分可能含有高純度產(chan) 品,但在其之前或之後也會(hui) 含有大量的不需要的蛋白質雜質。洗脫過程(梯度洗脫)如圖所示,該圖說明用HIC分離純化時,在洗脫步驟中,應將柱後流出液進行等份收集,這樣才可以獲得適宜純度的產(chan) 品。

微信截圖_20220129105835.png

洗脫過程可采用等度或梯度的方式進行。4種最常見的洗脫結合蛋白質的方法如下:


1、降低鹽濃度(相對於(yu) 結合條件

鹽濃度的降低會(hui) 相應地減弱蛋白質和配基間的疏水作用,進而蛋白質被解吸附並從(cong) 層析柱上洗脫下來。

2、加入有機溶劑

有機溶劑(如乙烯或丙二醇)的加入可以改變溶液的極性,從(cong) 而可以幹擾疏水作用。

3、提供鹽濃度(采用離液鹽)

離液鹽的加入可以幹擾疏水作用。

4、加入去汙劑

去汙劑可以用做蛋白質置換劑,主要用於(yu) HIC純化膜蛋白。


在洗脫步驟中,將蛋白質從(cong) HIC填料上洗脫的zui常用方法是降低鹽濃度。用HIC純化新的蛋白質組分時,同樣首先采用該方法。上述其他方法的缺點在於(yu) ,需要額外加入物質,而這些物質可能影響蛋白質的穩定性。但是,洗脫與(yu) 填料結合比較緊密的蛋白質時,還是需要這些試劑的。


以下是月旭科技現有的HIC填料:


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