親和層析中的蛋白洗脫

親(qin) 和層析是根據一種生物分子間的特異相互作用來分離物質的層析方法，利用待分離物質與(yu) 配體(ti) 間所具有的特異性親(qin) 和力來達到分離目的的一類特殊層析技術。如抗原與(yu) 抗體(ti) 、DNA與(yu) RNA、酶與(yu) 底物或抑製物等。

從(cong) 親(qin) 和層析填料上洗脫結合靶標是結合的可逆過程，需優(you) 化條件，削弱靶標和配基之間的相互作用。洗脫條件不應使靶蛋白變性，除非這些條件與(yu) 下遊程序兼容。

有兩(liang) 種類型的洗脫方法，即特異性洗脫和非特異性洗脫。

特異性洗脫過程中，介質或競爭(zheng) 配基或競爭(zheng) 靶標，通過這種形式攻擊蛋白質-配基複合物，繼而將靶蛋白釋放至溶液中。用於(yu) 洗脫的競爭(zheng) 介質的濃度和量（體(ti) 積）依賴於(yu) 其親(qin) 和力，這種親(qin) 和力與(yu) 固定複合物的親(qin) 和力相關(guan) 。與(yu) 親(qin) 和力強的添加物相比，競爭(zheng) 介質的結合越弱越需要更高的濃度和更大的體(ti) 積。對於(yu) 弱的競爭(zheng) 介質，比配基高10倍是較好的濃度起點。特異性洗脫通常是溫和的，更可能保留蛋白質的活性。這種方法的缺點在於(yu) ：洗脫慢、洗脫峰寬、需要從(cong) 回收的蛋白質中去除競爭(zheng) 介質。

對於(yu) 非特異性洗脫，需根據配基與(yu) 蛋白質之間的相互作用機製優(you) 化洗脫條件，如增加鹽濃度、降低離子相互作用或通過改變pH來改變質子化/離子化狀態，從(cong) 而調節氫鍵強度、疏水相互作用及靜電相互作用。從(cong) 固定的Protein G上洗脫抗體(ti) 就是一個(ge) 改變pH的例子，然而Protein G與(yu) 抗體(ti) 的親(qin) 和力非常強，需要不同洗脫條件組合達到zui大程度的抗體(ti) 釋放。通常，親(qin) 和作用需要靶蛋白正確地三維折疊，因此離液劑或影響蛋白質折疊的試劑可用於(yu) 洗脫目標蛋白質，但是，必須注意保證靶標的正確折疊在洗脫後迅速恢複天然條件。當親(qin) 和力弱時，高濃度靶分子結合後，通過稀釋以解離、洗脫複合物。

月旭科技可提供的親(qin) 和層析填料

◌ Protein G Tanrose 4FF抗體(ti) 親(qin) 和介質

◌ Ni Tanrose 6FF（NTA/IDA）/Ni Tanrose 6HP（NTA）/Ni Tanrose 4FF（NTA/IDA）金屬螯合親(qin) 和介質

◌ Co Tanrose 6FF（NTA）金屬螯合親(qin) 和介質

◌ IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親(qin) 和介質

◌ Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親(qin) 和介質

◌ GST Tanrose 4FF穀胱甘肽親(qin) 和介質

◌ Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親(qin) 和介質

◌ Endotoxin rem Tanrose 4FF內(nei) 毒素親(qin) 和填料

◌ NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預活化親(qin) 和填料

月旭科技可提供預裝柱供您選擇