蛋白含量測定常用方法有哪些？

蛋白純化是目前生物研究鄰域中較為(wei) 熱門的一個(ge) 大方向，其中蛋白含量測定是純化過程中很重要的一項內(nei) 容。

zui常用的蛋白含量測定分析方法有：馬斯亮藍法（Bradford）、Folin-酚試劑法（Lowry）、BCA法等。

Folin-酚試劑法（Lowry）：蛋白質在堿性溶液中肽鍵與(yu) Cu²⁺鼇合，形成蛋白質-銅複合物，還原酚磷鉬酸，產(chan) 生藍色化合物，藍色深淺與(yu) 蛋白質濃度呈線性關(guan) 係。靈敏度在1-5μg/mL，是目前zui靈敏的測定方法，但耗費時間長，操作需嚴(yan) 格計時，顏色深淺隨不同蛋白質而變化，因為(wei) 其中的酒石酸鉀-硫酸銅試劑配置保存困難，逐漸被考馬斯亮藍法取dai。

考馬斯亮藍法（Bradford）：考馬斯亮藍G-250染料與(yu) 蛋白質結合呈藍色，在波長595nm有吸收峰，在一定的範圍內(nei) 與(yu) 蛋白質的含量呈線性關(guan) 係。靈敏度在25-250μg/mL左右，應用廣泛，顏色穩定，專(zhuan) 一性較差，幹擾物質多。

BCA法：BCA法基於(yu) 雙縮脲原理，堿性條件下蛋白質將Cu²⁺還原成Cu⁺，BCA鼇合Cu⁺作為(wei) 顯色劑，產(chan) 生藍紫色並在562nm有吸收峰，單價(jia) Cu⁺與(yu) 蛋白質呈劑量相關(guan) 性。靈敏度在0.5-20μg/mL之間，用於(yu) 快速檢測，抗幹擾能力強，但受金屬螯合劑影響。

每種測定方法都不是wan美無缺的，都有其優(you) 缺點，在選擇時應考慮：

① 試驗所要求的靈敏度和精確度；

② 蛋白質的性質；

③ 溶液中存在的幹擾物質；

④ 測定時所耗費的時間等因素。

就具體(ti) 情況選擇最合適的試驗方法。