影響凝膠色譜分離的因素

各種凝膠在結構上是很相似的，都是三維空間網狀交織的高分子聚合物。分離程度主要取決(jue) 於(yu) 凝膠顆粒內(nei) 部微孔的孔徑和混合物的分子量這兩(liang) 個(ge) 因素。微孔孔徑的大小與(yu) 凝膠物質中凝膠濃度的平方根呈反比，與(yu) 凝膠聚合物分子的平均直徑呈正比（其聚合物分子近似地當做球形）。和凝膠孔徑直接關(guan) 聯的是凝膠的交聯度，交聯度越高，孔徑越小；反之，孔徑就大。移動緩慢的小分子物質，在低交聯度的凝膠上不容易分離，大分子同小分子物質的分離也宜用高交聯度的凝膠。葡聚糖凝膠的交聯度隨每克幹燥凝膠的吸水量的增加而遞減。

根據具體(ti) 實驗情況決(jue) 定洗脫液的流速，一般采用30~200mL/h。流速過快會(hui) 使色譜帶變形，影響分離效果，流速的調節可采用靜液壓法裝置。

非水溶性物質的洗脫，采用有機溶劑，水溶性物質的洗脫，一般采用水或具有不同離子強度和pH的緩衝(chong) 液。離子強度的變化，對於(yu) 物質的分離有不同的影響。在洗脫堿性蛋白時，洗脫劑中必須含有一定濃度的無機鹽，而且隨著鹽濃度的增加，移動加快。pI低於(yu) 7的蛋白質的洗脫，很少受離子強度變化的影響。在酸性pH時，堿性物質易於(yu) 洗脫。多糖類物質洗脫以水最佳。

凝膠色譜很少用在分離純化的開始階段。為(wei) 了達到良好的分離效果，柱子的上樣量必須保持較小的體(ti) 積。對於(yu) 蛋白質來說，上樣量通常為(wei) 柱體(ti) 積的2%~5%。樣品中含有雜質太多時就有可能堵塞柱子。凝膠色譜通常用在分離純化的最後階段，此時的目的產(chan) 物已經比較純，濃度較高。樣品加到色譜柱後，選用合適的洗脫液進行洗脫，通常目的產(chan) 物被稀釋很多倍。