蛋白質純化注意事項

在蛋白質純化過程中，需注意幾個(ge) 問題。首先，提純過程中始終要控製pH值，盡量避免由於(yu) 過酸或過堿而引起蛋白質構象的不可逆變化。緩衝(chong) 液要有合適的pH值，又要對蛋白質無害，在提純植物和菌類中的蛋白質時，通常需要較大的緩衝(chong) 容量，此時要注意緩衝(chong) 液的濃度，同時還要注意緩衝(chong) 液組分是否合適，會(hui) 不會(hui) 產(chan) 生副反應等。含巰基的蛋白質（其中的巰基未結合成二硫鍵時）特別容易被氧化，因此，要維持一個(ge) 還原環境。可加入一些含有巰基的還原劑，並使整個(ge) 體(ti) 係保持無氧狀態，以解決(jue) 此問題，但在有些情況下，加入的巰基化合物可能會(hui) 抑製蛋白質的活力。

提純過程中，通常要保持低溫，因為(wei) 細胞內(nei) 有蛋白水解酶存在，這種酶在組織勻化後處於(yu) 活化狀態，能降解蛋白質。因此，必須保持低溫來降低水解酶的作用。但要注意，有時低溫又能使某些酶的四級結構遭到破壞。一般情況下，蛋白質在0℃時比較穩定，但丙酮素羧化酶對冷敏感，25℃時穩定。有些酶則需在-20℃或-70℃下穩定活性。

此外，還有一些常用的辦法可有效地減少蛋白質變性，如有些二價(jia) 離子（Mg²⁺、Ca²⁺等）的存在有助於(yu) 蛋白質或蛋白絡合物的穩定；提純酶時，可以加入專(zhuan) 一性的底物；有時候需要使用絡合劑（如乙二胺四乙酸鹽）除去不需要的離子，特別是那些由水源帶來的有害金屬離子。這些方法可視不同情況加以利用。

要注意的另一個(ge) 因素是，在提純過程中即使很小心，蛋白質也會(hui) 發生結構上的變化。因此，提純後的蛋白質，即使其活力基本上得以保留，它的構象也可能不同於(yu) 天然構象或完整功能的構象。在這種情況下，在生物體(ti) 外測得的蛋白質的性質未必能準確地反映這些大分子在活體(ti) 內(nei) 的性狀。

含多個(ge) 亞(ya) 單位蛋白質的解離是一種特殊類型的變性。提純蛋白質時，當所測得的活力是僅(jin) 由一種亞(ya) 單位表現出來的時候，其他的亞(ya) 單位可能會(hui) 因為(wei) 注意不到而丟(diu) 失。有的蛋白質在體(ti) 內(nei) 具有多功能形式，其生物活性是由兩(liang) 個(ge) 以上不同的遺傳(chuan) 基因決(jue) 定的蛋白質一起顯示出來的。那麽(me) 由一個(ge) 已經純化的蛋白質的性質去推斷它在體(ti) 內(nei) 完整的生物學功能時要特別小心。這時分析提純過程中總的活力是有益的。在提純的早期階段，如果用總活力作基準，在提純結束時希望能回收50%總活力，而實際所能達到的收率往往隻有5%-20%。在有些情況下，特別是有大量原料可供利用的情況下，我們(men) 可專(zhuan) 心致力於(yu) 獲得高比活的樣品，而不必顧忌收率。