親和色譜填料結構
更新時間:2021-12-10 點擊次數:2567
親(qin) 和層析是根據一種生物分子間的特異相互作用來分離物質的層析方法,利用待分離物質與(yu) 配體(ti) 間所具有的特異性親(qin) 和力來達到分離目的的一類特殊層析技術。如抗原與(yu) 抗體(ti) 、DNA與(yu) RNA、酶與(yu) 底物或抑製物等。
親(qin) 和色譜填料由基體(ti) 、配體(ti) 和間隔臂三部分組成。

基體(ti) 是有一定粒度、一定剛性、多孔的表麵有大量可反應基團的固體(ti) 物質,用於(yu) 支撐間隔臂和配體(ti) ,在其表麵通過反應鍵合上間隔臂和配體(ti) 後製得親(qin) 和色譜填料。基體(ti) 有兩(liang) 類:一類是有機聚合物,如纖維素、交聯葡聚糖、交聯瓊脂糖等;第二類是多孔玻璃和矽膠。
基體(ti) 應具備的條件:
1.基體(ti) 是不溶性支持物,具有三維的多孔網絡結構,有足夠大的排阻極限,大分子能不受阻礙地進出內(nei) 孔。
2.基體(ti) 顆粒應該是均勻的球形並具剛性,粒度均勻,孔徑分布範圍小,機械性能好。
3.基體(ti) 必須是親(qin) 水性及惰性的,其骨架與(yu) 蛋白質或其他重要生化物質的作用必須極弱,以降低非特異性吸附。
4.基體(ti) 理化性質穩定,不會(hui) 被製備填料時的試劑和流動相破壞。
5.基體(ti) 必須具有大量表麵活性基團。
配體(ti) 是接到基體(ti) 或間隔臂上與(yu) 蛋白質分子發生作用的部分,配體(ti) 的選擇是親(qin) 和色譜的關(guan) 鍵。配體(ti) 有兩(liang) 類:一類叫特異性配體(ti) ,隻對一種蛋白質具有結合能力;另一類叫組特異性配體(ti) ,也叫通用性配體(ti) ,對某一類蛋白質具有結合能力。

| 配體(ti) 與(yu) 待分離的生物分子有特異性結合。
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| 配體(ti) 既要能有效地與(yu) 生物分子結合,親(qin) 和力相當,又能有效地與(yu) 所吸附的生物分子解離。 |
| 配體(ti) 既有能特異性地與(yu) 待純化的蛋白質分子相結合的活性點,又有與(yu) 基體(ti) 或間隔臂相偶聯的化學基團。 |
| 配體(ti) 自身應具有良好的穩定性,能耐受偶聯以及洗脫時的溫度變化和化學環境,製得的填料可以多次重複使用。 |
盡可能選擇無離子基團、疏水性小的的配體(ti) 。
親(qin) 和色譜分離對象是生物大分子,其體(ti) 積大,並且隻能以特定的部位與(yu) 配基作用,通常因為(wei) 空間位阻效應,使其作用位點不易接近配體(ti) 。所以,一般在配體(ti) 與(yu) 基體(ti) 之間接上一個(ge) 有一定長度的間隔臂,使配體(ti) 伸離基體(ti) 表麵一定的距離,就可以克服這空間阻礙。
間隔臂的兩(liang) 端都有能與(yu) 其他基團反應的活性官能團,活性官能團如NH2、OH、COOH等,它的一端先與(yu) 基體(ti) 反應,形成帶間隔臂的基體(ti) ,產(chan) 物仍帶一個(ge) 可反應的端基,可以再與(yu) 配體(ti) 偶聯。
親(qin) 水性的、無離子基團的、沒有太多支鏈或大基團的、適當鏈長的小分子適合作間隔臂。

1. Protein A Solid/Protein A 4FF/Protein G Tanrose 4FF 抗體(ti) 親(qin) 和介質
2. Ni Tanrose 6FF(NTA/IDA)/Ni Tanrose 6HP(NTA)/Ni Tanrose 4FF (NTA/IDA)/Co Tanrose 6FF(NTA)金屬螯合親(qin) 和介質
3. IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親(qin) 和介質
4. Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親(qin) 和介質
5. GST Tanrose 4FF穀胱甘肽親(qin) 和介質
6. Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親(qin) 和介質
7. Endotoxin rem Tanrose 4FF內(nei) 毒素親(qin) 和填料
8. NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預活化親(qin) 和填料