月旭煉金術士教您如何選擇緩衝鹽

各位小夥(huo) 伴在做方法開發時，緩衝(chong) 鹽是經常會(hui) 使用到的一類試劑，那麽(me) 小夥(huo) 伴們(men) 對緩衝(chong) 鹽了解多少呢，我們(men) 該如何選擇合適的緩衝(chong) 鹽呢，這裏就讓小編給各位小夥(huo) 伴們(men) 講解一二。

什麽(me) 時候需要緩衝(chong) 鹽？

在反相色譜分析中，流動相的pH值一般在2-7之間，當分析物在反相條件下可解離，或樣品的pH值在2－7之外時，就需要緩衝(chong) 鹽，在反相條件下可解離的化合物一般有氨基和羧基，他們(men) 的pKa在1－11之間，選擇正確的緩衝(chong) 液pH值可保證解離的官能團處於(yu) 一種形式，離子形式或中性化合物的形式；如果樣品的pH值對柱子有傷(shang) 害，則緩衝(chong) 溶液可使其變溫和或減小其危害，常規矽膠基質色譜柱的pH耐受範圍2-8。

常見緩衝(chong) 鹽分類

堿類

堿類添加劑常見的是氨水和三乙胺，兩(liang) 者都能讓水的pH到達非常高的水平，高到能把矽膠顆粒溶解掉，要慎用，另外就是這兩(liang) 種溶劑通常不太容易通過衝(chong) 洗維護的方式清除掉。尤其是三乙胺，即使是色譜純，放的久了也可能會(hui) 由於(yu) 變質導致汙染。

酸類

甲酸：通常使用的濃度在1%以下，能夠讓水的pH達到二點幾的級別。

乙酸：酸性比甲酸略弱，通常使用濃度不超過5%，能夠使水的pH到達到二點幾的級別。

三fu乙酸：比較強的酸，使用濃度通常不超過0.5%，能使水的pH達到2以下，具有很大的離子強度及一定的離子對作用，是分析蛋白/多肽時常用的添加劑。以上三種酸z致命的問題在於(yu) 低波長下的紫外吸收，通常不建議在小於(yu) 215nm波長的情況下使用，另外就是甲酸/乙酸還有比較大的揮發性，時間久了濃度會(hui) 發生變化。

磷酸：這是一種不具有揮發性的酸，離子強度也不錯，重要的是，它在低波長紫外區無本底吸收，但是它也存在不少缺點，比如不能兼容質譜方法。

除此之外，還有一些其他的酸，比如硫酸，鹽酸或者檸檬酸，但是都是非常罕見。

鹽類

相比單純的酸堿，根據不同緩衝(chong) 鹽中兩(liang) 種鹽的配比，可以很容易的配置出一定pH的緩衝(chong) 溶液，具有緩衝(chong) 能力的鹽類可以很好的控製流動相的pH值。

甲酸鹽：通常在液相色譜中常用的甲酸鹽都是甲酸銨，這類鹽的溶解度好，*兼容液質聯用的方法，對色譜柱的傷(shang) 害也比較小，但是缺點是離子強度比較低。另外就是甲酸鹽比較容易潮解，稱量的時候比較困難，在流動相裏還可能揮發。

與(yu) 甲酸配合，可以得到甲酸-甲酸銨緩衝(chong) 體(ti) 係，大概緩衝(chong) 能力在pH3～4.5的範圍之內(nei) ，隻要調節兩(liang) 者濃度的比例即可。

乙酸鹽：常見為(wei) 乙酸銨。在使用上，和甲酸鹽十分類似，離子強度也不高，與(yu) 乙酸配合的乙酸-乙酸銨緩衝(chong) 體(ti) 係pH的控製能力在pH4～5.5左右。

磷酸鹽：是HPLC在紫外檢測條件下常用的緩衝(chong) 液之一，因為(wei) 它可以在低於(yu) 220 nm的波長下使用。磷酸鹽具有三個(ge) pKa值，可提供pH 1.1-3.1，6.2-8.2，11.3-13.3三個(ge) 緩衝(chong) 範圍。雖然它使用廣泛，但是也要注意它的溶解度問題，防止高濃度條件下在HPLC泵或者色譜柱中析出。

常用的是磷酸的鈉鹽和鉀鹽，二者對pH的控製能力十分接近，隻是離子強度稍有差異，絕大多數情況下是可以互換使用的，磷酸由於(yu) 是多元酸，能夠形成一氫鹽和二氫鹽，所以使用磷酸緩衝(chong) 體(ti) 係調節pH也是組合比較多，跨度比較大的，並且可以提供較高的離子強度，可惜，磷酸鹽流動相體(ti) 係無法兼容質譜。

以磷酸鈉鹽為(wei) 例，可以有以下兩(liang) 種組合的緩衝(chong) 體(ti) 係：

磷酸-磷酸二氫鈉：pH可以達到1.2～3.1左右的範圍。
磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉：pH可以達到6.5～8左右的範圍。

通過樣品的pka值選擇合適緩衝(chong) 鹽

pH 變化會(hui) 對不同結構化合物的色譜行為(wei) 產(chan) 生不同的影響。中性化合物在反相色譜係統的保留與(yu) pH 無關(guan) ；

酸性化合物在pH 趨於(yu) 酸性（pH 變小，尤其低於(yu) 化合物的pka 值）時會(hui) 因狀態趨於(yu) 中性而增加保留；

堿性化合物在pH 趨於(yu) 堿性（pH 變大，尤其高於(yu) 化合物的pka 值）時會(hui) 因狀態趨於(yu) 中性而增加保留。

反之，高pH 時酸性化合物保留降低；低pH時堿性物質保留會(hui) 降低。若想獲得穩定的保留，對於(yu) 酸性待測物而言，流動相的pH 值-好低於(yu) 待測物pka值兩(liang) 個(ge) 單位；對於(yu) 堿性待測物來說，流動相的pH值--好高於(yu) 待測物pka值兩(liang) 個(ge) 單位。

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