影響HPLC保留時間漂移因素有哪些？如何解決？

Hello，大家好，小編又和大家見麵了。在前期內(nei) 容中，大家已經了解氣相色譜法、SPE固相萃取技術在食品檢測領域中的應用。那麽(me) ，今天小編就帶大家了解另外一種分離分析技術——HPLC（高效液相色譜法）。

HPLC

HPLC是20世紀60年代末開始發展起來的新型高效分離分析技術，是以液體(ti) 為(wei) 流動相，可以解決(jue) 沸點高、難氣化、熱穩定性差、極性強的化合物分析。但在使用過程中經常會(hui) 出現化合物保留時間重現性不好的現象，一般有兩(liang) 種情況，即保留時間波動和保留時間漂移。前者是指保留時間沒有固定規律的變化，而後者指保留時間沿著單方向發生改變。保留時間波動往往與(yu) 儀(yi) 器檢測條件、泵穩定性密切相關(guan) ，保留時間漂移一般是由色譜柱老化、柱效變差所引起。

今天，我們(men) 就詳細地了解一下，影響保留時間漂移的因素有哪些？以及該如何解決(jue) ？

如若發生保留時間漂移，首先需要考慮流動相是否已使色譜柱達到充分的平衡。一般情況下，流動相平衡色譜柱需要10-20個(ge) 柱體(ti) 積；但如果流動相中有使用弱酸、弱堿、緩衝(chong) 鹽和離子對試劑，則需要更長的時間來平衡色譜柱。還有可能是流動相受到汙染（水是容易受到汙染的流動相成分），存在於(yu) 流動相中的小分子汙染物會(hui) 在色譜柱中慢慢富集，從(cong) 而也會(hui) 造成保留時間的漂移。

不同填料、不同鍵合相的色譜柱，其固定相的穩定性也有所區別。如：普通矽膠填料色譜柱的耐受pH範圍為(wei) 2-8；聚合物基質色譜柱耐受pH範圍在1-14；有機無機雜化矽膠填料的耐受pH範圍能達到1-12.5。即使在推薦的pH範圍內(nei) 使用色譜柱，隨著進樣次數的增加，使用時間的延長，也會(hui) 造成鍵合相的水解脫落。水解速度與(yu) 所使用的流動相類型和配體(ti) 有關(guan) 。相比於(yu) 單官能團配體(ti) ，雙官能團配體(ti) 和三官能團配體(ti) 的鍵合相更加穩定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相要穩定；烷基鍵合相比氰基鍵合相更加穩定。

色譜柱也是分析試驗中的耗材，所以在使用過程中需要按照說明書(shu) 進行相關(guan) 維護。當保留時間漂移嚴(yan) 重時，很有可能是色譜柱壽命已到，需要及時進行更換。

在分析試驗中，星空体育全站不但會(hui) 吸附待測組分，同時也會(hui) 對流動相攜帶的其他物質產(chan) 生吸附。造成色譜柱汙染的來源可能是：流動相試劑瓶、流動相本身、儀(yi) 器連接管路、進樣器、泵和密封墊，以及樣品本身所攜帶的雜質。樣品基質中如果含有保留性很強的汙染物，就可能是待測組分保留時間產(chan) 生漂移的根源。如：環境水樣中的腐殖酸、血清中的蛋白和脂類化合物以及配藥中的賦形劑等。這些樣品中的汙染物會(hui) 在色譜柱的前端進行富集，導致保留時間漂移，同時也會(hui) 伴有柱壓的升高。

可以通過SPE、QuEChERS等前處理方法對樣品進行淨化，去除樣品中的雜質和汙染物。此外，可以通過使用保護柱來避免汙染物與(yu) 分析柱的直接接觸，或者通過反衝(chong) 色譜柱來除去汙染物（月旭科技絕大多數色譜柱都可以進行反衝(chong) ）。

流動相組成成分的變化也會(hui) 引起保留時間的漂移，如流動相中易揮發組分的流失、變質等。 

於(yu) 進行過封尾處理的反相色譜填料，當使用接近100%的水為(wei) 流動相時，會(hui) 發生分離突然喪(sang) 失、待測組分保留減弱，甚至不保留的現象，此種情況就是疏水坍塌。原因是100%的水相不能浸潤反相色譜填料，挽救的辦法是先用含大量有機相的流動相浸潤色譜柱，再用分析流動相進行平衡。色譜柱長期儲(chu) 存也會(hui) 發生此種現象。使用嵌有極性基團的反相柱（如Ultimate polar-RP）或者未進行封尾處理的色譜柱可以有效避免發生坍塌現象。