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葡聚糖凝膠LH-20,天然產物精細純化的得力助手

更新時間:2020-08-12 點擊次數:2487

圖|蛋白純化填料

 

天然產(chan) 物是指從(cong) 動物、植物及微生物中分離出來的生物二次代謝產(chan) 物,自從(cong) 發現來自天然界的有機化合物具有特殊的生理活性後,已經開發出許多具有治療和保健作用的藥物。

由於(yu) 天然產(chan) 物往往含有結構、性質不同的多種成分,且有效成分的含量一般較低。為(wei) 了研究和開發天然產(chan) 物,就要選擇合適的層析填料,從(cong) 複雜的中草藥組成成分中提取、分離出有活性的單體(ti) 純成分。

 

產(chan) 品介紹

葡聚糖凝膠LH-20通過葡聚糖凝膠 G-25的羥丙基化製備,並且專(zhuan) 門適合用於(yu) 有機溶劑分離嗜脂性分子,天然產(chan) 物在有機溶劑中的純化,例如類固醇,萜類化合物,脂質和低分子量肽。

 

 產(chan) 品參數

 

 

葡聚糖凝膠 LH-20 的使用方法

 

將幹粉浸泡於(yu) 60-70%乙醇中(充分攪拌),洗去可能存在的殘留物,抽幹然後濕態不間隙裝柱,不能出現凝膠斷層(否則要重新裝柱),動態用一倍柱體(ti) 積的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗淨乙醇即根據自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩(liang) 個(ge) 柱體(ti) 積直到基線變得平穩為(wei) 止,如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質,並根據性質確定柱高。如使用相同的溶劑,在以後的層析中柱平衡可以省略。

 

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑

 

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為(wei) 兩(liang) 類:反相和正相兩(liang) 種。用得多的是反相溶劑洗脫,以甲醇——水係統z為(wei) 常見,先用水,逐漸增加甲醇比例,後用 100%甲醇衝(chong) 柱。正相係統以lv仿——甲醇z為(wei) 常見,先用 50%lv仿——甲醇,逐漸增加甲醇比例,後用 100%甲醇衝(chong) 柱。

 

樣品的處理和洗脫溶劑的選擇

 

如果樣品極性大,選用反相溶劑洗脫(甲醇——水),樣品用少體(ti) 積的甲醇——水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾後,濕法上樣(必須要進行過濾!否則把葡聚糖凝膠 LH-20 堵塞,就必須將葡聚糖凝膠 LH-20 的柱頭部分棄去, 造成不必要的浪費) 。如果樣品極性小, 這選用正相溶劑洗脫 (lv仿——甲醇) ,樣品用少體(ti) 積的lv仿——甲醇溶解,過濾後,濕法上樣。

 

葡聚糖凝膠LH-20的分離技巧

 

(1)流速要控製好,流速不可太快,為(wei) 了快加壓,分子篩效果會(hui) 降低:過慢會(hui) 導致樣品在柱子擴散嚴(yan) 重,達不到分離效果。

(2)柱子盡可能長,Tandex LH-20 柱長的增加將ji大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(you) 勢兵力,打擊敵人。

(3)餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個(ge) 保留體(ti) 積接成一餾分。

(4) 洗脫體(ti) 積一般為(wei) 2-3個(ge) 保留體(ti) 積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個(ge) 保留體(ti) 積。

(5)如果黃酮類化合物粗提物中有鞣質,那麽(me) 你就要小心了,Tandex LH-20對鞣質幾乎是死吸附的。如果不考慮填料,可用Tandex LH-20分鞣質。

(6)填料反複使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗幹淨,然後用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來。

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