色譜柱的“長生不老”xiulian之術—上篇

壽命

色譜柱壽命不理想的問題一直困擾著眾(zhong) 多實驗室的小夥(huo) 伴們(men) ，針對各品牌色譜柱的壽命表現均低於(yu) 它們(men) 的普遍壽命的情況，不少小夥(huo) 伴紛紛表示其玻璃心不堪色譜柱年輕即逝的打擊。對此，月旭科技為(wei) 您仔細研究了色譜柱的“長生不老”之術，解決(jue) 色譜柱壽命不理想的問題，話不多說，快跟隨小編腳步一起往下看吧！

月旭科技將為(wei) 您提供以下解決(jue) 思路

01 di一步

自查：

1、是否使用同填料保護柱（相同品牌）；

2、流動相從(cong) 配置到棄用在 12 小時以內(nei) ；

3、流動相瓶子嚴(yan) 格清洗幹燥，密封；

4、濾頭濾膜材質和品質是否選擇錯，注意查看是否使用後有溶解現象；

5、使用廠家推薦的衝(chong) 洗方式衝(chong) 洗色譜柱。

02 第二步

以上自查項目改善後均不能解決(jue) ，則采取第二步：與(yu) 廠家溝通，建議寄回廠家進行色譜柱“解剖”，月旭科技擁有多年專(zhuan) 業(ye) “解剖”各種問題色譜柱的經驗，為(wei) 您總結出可能出現的原因如下：

原因一：色譜柱汙染

可能出現的原因

1、樣品組分吸附在色譜柱的前端

a、可能是由於(yu) 樣品在流動相中的溶解度低而沉澱出來的；

b、樣品中有強保留物質（與(yu) 鍵合相極性相似的物質）；

c、樣品或者流動相中與(yu) 填料表麵發生微弱的不可預知的化學反應；

d、樣品溶劑本身的pH值在色譜柱的耐受臨(lin) 界值附近，而且進樣體(ti) 積較大（內(nei) 徑4.6mm，上樣體(ti) 積在 50μl 以上）。

通常這樣的情況伴隨柱壓升高；或者柱壓正常，一個(ge) 色譜圖中出現有些峰形異常，有些峰形正常的情況。

解決(jue) 方法

a、 盡量從(cong) 根源上解決(jue) 問題，選擇合適的樣品前處理技術，去除掉強保留物質，獲得更加“幹淨”更加成分單一的樣品；

b、 使用保護柱，保護柱的選擇盡量與(yu) 分析柱同等填料，同等鍵合方法的保護柱，如果使用不同品牌填料、不同裝填工藝的保護柱，在分離能力和保護方麵可能得不到ZH的效果，也不要使用更大粒徑的保護柱，更大粒徑或者裝填較差的保護柱會(hui) 因為(wei) 它的峰展寬作用而導致分離能力下降。

2、流動相“髒”了

流動相在色譜柱中的使用量比樣品要大得多，不停的衝(chong) 刷色譜柱，如果流動相變質或者有其他的汙染物，那對色譜柱的汙染會(hui) 比樣品更大，色譜柱對流動相反而是一種淨化，而且在運行梯度時，還會(hui) 出現鬼峰。

解決(jue) 方法

a、流動相配置後盡快使用，多不超過 12 小時；

b、有機相和鹽相混合的流動相，更容易導致鹽的析出，盡量使用在線混合，且在運行梯度時變化速率不宜太快，避免鹽析出；

c、用專(zhuan) 業(ye) 的經過鈍化處理過的溶劑瓶裝流動相，切忌不能使用塑料瓶，做好密封，在更換流動相的時候同時更換試劑瓶；

d、水在接觸空氣或者離開製水設備以後會(hui) 出現變質，現用現製，打開後盡快使用。

原因二 固定相損壞

由色譜條件的多方麵作用而導致的固定相損壞，是目前的色譜技術不能解決(jue) 的一個(ge) 問題。一般情況下小基團鍵合相更容易被水解而脫落，加快了鍵合相的脫落。矽膠裸露以後暴露在流動相中，增加了鹽等對矽膠骨架的攻擊，導致骨架變薄，機械強度降低，表現為(wei) 柱頭塌陷。

可能出現的原因

a、流動相中的鹽，尤其是磷酸類的緩衝(chong) 鹽，對矽膠的攻擊是較強的；

b、高柱溫，加快鹽運動的速率；

c、高氧，流動相中未排除的氧，會(hui) 加快矽膠內(nei) 部鍵的斷裂；

d、高pH（＞8），OH 根離子攻擊矽膠內(nei) 部的 Si-O-Si 鍵，導致矽膠直接破碎；

e、低 pH（＜2），H 根離子攻擊矽膠表麵的 Si-C 鍵，鍵合相脫落以後，矽膠裸露出來；

f、高水，也是引起鍵合相水解矽膠裸露的重要誘因。

解決(jue) 方法

a、使用鹽的時候，柱溫 ≤30℃；

b、鹽的濃度使用在 50mmol 以下；

c、使用在線脫氣機或者超聲脫氣（10 分鍾，時間太久會(hui) 發熱導致流動相成分改變）；

d、除了特殊標注，色譜柱的使用 pH 值在 2-8 之間，如果樣品溶解的 pH 較苛刻，請使用保護柱來抵禦 pH 所帶來的損傷(shang) ，並及時更換；

e、不要把未標注能耐受純水的色譜柱使用在水相大於(yu) 95% 的流動相條件下。