蛋白質在組織或細胞中是以複雜的混合物形式存在，每種類型的細胞都含有上千種不同的蛋白質，至今還沒的單獨或一tao現成的方法能移把任何一種蛋白質從(cong) 複雜的混合蛋白質中提取出來，因此往往采取幾種方法聯合使用。在這裏小編就給各位小夥(huo) 伴說道說道目前主流的蛋白質分離方法。
根據蛋白質溶解度不同的分離方法
（1）蛋白質的鹽析
不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質，並能再度溶解而不變性。中性鹽(一般為(wei) 硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉，其中應用z多的硫酸銨，它的優(you) 點是溫度係數小而溶解度大，也不易引起變性)對蛋白質的溶解度有顯著影響，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高，蛋白質的溶解度增加，此稱鹽溶；當鹽濃度繼續升高時，蛋白質的溶解度不同程度下降並先後析出，這種現象稱鹽析，將大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子（如硫酸銨的SO4和NH4)有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之“失水”，於(yu) 是蛋白質膠粒凝結並沉澱析出。
鹽析時若溶液pH在蛋白質等電點則效果更好。由於(yu) 各種蛋白質分子顆粒大小、親(qin) 水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣，因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉澱。
影響鹽析的因素有：
（a）溫度：除對溫度敏感的蛋白質在低溫（4度）操作外，一般可在室溫中進行。一般溫度低蛋白質溶解度降低。但有的蛋白質（如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白）在較高的溫度（25度）比0度時溶解度低，更容易鹽析。
（b）pH值：大多數蛋白質在等電點時在濃鹽溶液中的溶解度低。
（c）蛋白質濃度：蛋白質濃度高時，欲分離的蛋白質常常夾雜著其他蛋白質地一起沉澱出來（共沉現象）。因此在鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋，使蛋白質含量在2.5-3.0%。
蛋白質在用鹽析沉澱分離後，需要將蛋白質中的鹽除去，常用的辦法是透析，即把蛋白質溶液裝入秀析袋內(nei) （常用的是玻璃紙），用緩衝(chong) 液進行透析，並不斷的更換緩衝(chong) 液，因透析所需時間較長，所以在低溫中進行。此外也可用葡聚糖凝膠TandexG-25F或TandexG-50過柱的辦法除鹽，所用的時間就比較短。
（2）等電點沉澱法
蛋白質在靜電狀態時顆粒之間的靜電斥力小，因而溶解度也小，各種蛋白質的等電點有差別，可利用調節溶液的pH達到某一蛋白質的等電點使之沉澱，但此法很少單獨使用，可與(yu) 鹽析法結合用。
（3）低溫有機溶劑沉澱法
用與(yu) 水可混溶的有機溶劑，甲醇，乙醇或丙酮，可使多數蛋白質溶解度降低並析出，此法分辨力比鹽析高，但蛋白質較易變性，應在低溫下進行。
根據蛋白質分子大小的差別的分離方法
（1）透析與(yu) 超濾
透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質分開。
超濾法是利用高壓力或離心力，強使水和其他小的溶質分子通過半透膜，而蛋白質留在膜上，可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質。
（2）凝膠過濾法
也稱分子排阻層析或分子篩層析，這是根據分子大小分離蛋白質混合物z有效的方法之一。柱中z常用的填充材料是葡聚糖凝膠（Tandex係列）瓊脂糖凝膠（Tanrose 係列）和瓊葡糖凝膠（SuperTandex pg係列）。
根據蛋白質帶電性質進行分離方法
（1）電泳法
各種蛋白質在同一pH條件下，因分子量和電荷數量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳，這是利用一種兩(liang) 性電解質作為(wei) 載體(ti) ，電泳時兩(liang) 性電解質形成一個(ge) 由正極到負極逐漸增加的pH梯度，當帶一定電荷的蛋白質在其中泳動時，到達各自等電點的pH位置就停止，此法可用於(yu) 分析和製備各種蛋白質。
（2）離子交換層析法
離子交換劑有陽離子交換劑（如：SP Tanrose 6FF）和陰離子交換劑（Q Tanrose 6FF），當被分離的蛋白質溶液流經離子交換層析柱時，帶有與(yu) 離子交換劑相反電荷的蛋白質被吸附在離子交換劑上，隨後用改變pH或離子強度辦法將吸附的蛋白質洗脫下來。
根據配體(ti) 特異性的分離方法－親(qin) 和層析法
親(qin) 和層析法（Affinity chromatography）
分離蛋白質的一種極為(wei) 有效的方法，根據某些蛋白質與(yu) 另一種稱為(wei) 配體(ti) (Ligand）的分子能特異而非共價(jia) 地結合進行分離。它經常隻需經過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從(cong) 很複雜的蛋白質混合物中分離出來，而且純度很高。
