抗體純化有難題，月旭科技有利器

單克隆抗體(ti) （簡稱單抗）廣泛用於(yu) 疾病的診斷、預防和治療。自1986年shou個(ge) 單抗藥物上市以來，已有近40種單抗藥物上市，還有300多種單抗處於(yu) 臨(lin) 床研究中。單抗藥物已成為(wei) 發展zui快的藥物領域之一。

 在單抗藥物的生產(chan) 過程中，對分離純化工藝的效率和成本的要求非常高，單抗的分離純化成本通常可占其生產(chan) 成本的50-70%。Protein A親(qin) 和介質是抗體(ti) 分離純化關(guan) 鍵的材料，其性能和成本決(jue) 定了單抗產(chan) 品的純度和收率和成本。

 目前，絕大多數的抗體(ti) IgG分子純化使用Protein A親(qin) 和層析。Protein A是金黃色葡萄球菌表麵的蛋白，分子量42kDa，有5個(ge) 不同的結構域可以結合IgG的Fc片段，具有很強的特異性親(qin) 和力，每個(ge) Protein A分子至少可以結合兩(liang) 個(ge) 抗體(ti) IgG分子。

Protein A Tanrose 4FF

 Protein A Tanrose 4FF 是用於(yu) 分離和純化單克隆抗體(ti) 、多克隆抗體(ti) 或 Fc-融合標簽的通用性親(qin) 和層析介質，ProteinA 有五個(ge) IgG結合區域和一些未知功能的區域，重組protein A去除了與(yu) 白蛋白及細胞表麵結合位點，隻含有五個(ge) IgG 結合區域，減少了非特異性吸附。

 Protein A Tanrose 4FF是以高度交聯的4%瓊脂糖凝膠為(wei) 基質，可以在相對較高的流速下進行單克隆抗體(ti) 和多克隆抗體(ti) 的純化，被工業(ye) 客戶普遍接受。

緩衝(chong) 液準備

 所用水和緩衝(chong) 液在使用之前建議用 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾。

平衡/ 洗雜液: 20mM Na₂ HPO₄ , 0.15M NaCl, pH7.0；

洗脫液: 0.1M 甘氨酸，pH3.0；

中和液：1M Tris-HCl，pH8.5。

樣品純化

 Protein A Tanrose 4FF 裝填好後，可以用各種常規的中低壓色譜係統。

🔸 將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜係統中，打開下出口，將預裝柱接到色譜係統中，並旋緊。

🔸 用 3-5 倍柱體(ti) 積的去離子水衝(chong) 洗出儲(chu) 存緩衝(chong) 液。

🔸 使用至少 5 倍柱床體(ti) 積的平衡液平衡色譜柱。

🔸 利用泵或樣品環上樣。注:樣品的粘度增加使得即使上樣體(ti) 積很少，也會(hui) 導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體(ti) 積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。

🔸 用洗雜液衝(chong) 洗柱子，直到紫外吸收達到一個(ge) 穩定的基線（一般至少 10-15 個(ge) 柱體(ti) 積）。

🔸 使用 5-10 倍柱體(ti) 積的洗脫液洗脫，收集洗脫液，即目的蛋白組分。洗脫組分需要立即調成中性，一般建議使用洗脫組分體(ti) 積 1/10 的中和液進行中和。