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簡單!新一代固相金屬離子親和填料問世!

更新時間:2019-10-10 點擊次數:1614

什麽(me) 是磷酸化蛋白質

蛋白質磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(P04)轉移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲(si) 氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從(cong) 而使蛋白質發生翻譯後修飾的過程。該修飾是蛋白質翻譯後修飾(PTM)中為(wei) 重要的形式,具有顯著的生物學功能,細胞增殖和凋亡,良性發育,信號轉導,新陳代謝,腫瘤發生等過程都有磷酸化蛋白質的插足,研究磷酸化蛋白質對探究生物學病變機理有著非常重要的意義(yi) 。

 

富集磷酸化蛋白質重要性

磷酸化蛋白質具有低豐(feng) 度和高動態性的特點,因此對磷酸化蛋白質組學研究首先需要對磷酸化蛋白樣品進行富集,降低樣品複雜程度和提高磷酸化位點鑒定數目。固相金屬離子親(qin) 和色譜法(IMAC)是磷酸化蛋白質組學研究中常用的磷酸化蛋白質富集技術之一。

 

 

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

固相金屬離子親(qin) 和填料

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金屬離子親(qin) 和填料,金屬離子Ti⁴⁺鼇合在磷酸酯 (phosphate ester) 為(wei) 配基的多級孔雜化整體(ti) 材料上形成的親(qin) 和填料,利用磷酸化基團與(yu) 固相化的Ti⁴⁺的高親(qin) 和力來富集磷酸化蛋白質。磷酸化蛋白質上的磷酸基團中的三個(ge) 氧原子分別與(yu) 富集材料上的三個(ge) 不同Ti⁴⁺螯合以形成穩定的八麵體(ti) 形的配位結構,這種配位方式提供了良好的結合能力。該填料具有吸附量大、選擇性好、成本低、適用範圍廣、操作簡單特點。

 

規格參數

基架名稱多麵體低聚倍矽氧烷(POSS)作為單體所製備的多級孔雜化整體材料
粒徑範圍幾十微米至幾百微米
結合載量63.6 mg/g
適用樣品範圍所有含有磷酸基團的蛋白質和肽段
磷酸化肽段富集特異性97%
pH穩定性強酸、強堿下均可使用
化學穩定性常見有機溶劑下均可使用
保存條件幹燥狀態下室溫保存
通用性操作步驟采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液,這樣可以在富集過程中,很大程度上避免疏水性非磷酸化肽段的吸附。去除上清溶液後,依次用洗滌溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mMNaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)進行洗滌,這樣可以da程度上洗去非特異性肽段。後采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。

 

應用案例

 

(a)β-酪蛋白酶解液直接進行分析的 MALDI TOF-MS譜圖和(b)Welchrom® Ti Poss材料富集後分析的MADLI TOF-MS譜圖

 

實驗條件:0.1µg β-酪蛋白酶解液;采用80% ACN/6% TFA水溶液作為(wei) 富集溶液,去除上清溶液後,依次用洗滌溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)進行洗滌,後采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。

 

圖a中,未經過富集的β-酪蛋白酶解液樣品MALDI譜圖中,非磷酸化肽段的質譜信號峰非常強,嚴(yan) 重影響了對磷酸化肽段的辨別。而經過Ti⁴⁺-IMAC富集,從(cong) MADLI譜圖中(圖b)可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信號峰,而且幾乎沒有出現任何非磷酸化肽段的信號峰。證實了Welchrom® Ti Poss富集對磷酸化肽段具有良好的富集能力。

產(chan) 品名稱

規格

貨號

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

250mg

ATI001

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