His鎳柱標簽蛋白純化，就是這麽簡單

簡 介

1975年，Porath等人提出了一種新的純化方法-固定化金屬鼇合層析，利用金屬離子（Ni2+，Cu2+等）與(yu) 氨基酸表麵的殘基（如組氨酸的咪唑基）的配位鼇合作用，來純化與(yu) 金屬離子有親(qin) 和作用的蛋白質。

組氨酸標簽由於(yu) 分子量小，幾乎不幹擾靶蛋白的功能、活性和結構而被廣泛的使用。固定的金屬離子親(qin) 和層析是純化組氨酸標簽蛋白的常用方法。

組氨酸標簽蛋白的純化工具

月旭Ni親(qin) 和填料Ni Tanrose 6FF（NTA）

Ni Tanrose 6FF（NTA）親(qin) 和介質是將金屬離子Ni2+鼇合在以氨三乙酸為(wei) 配基的6%高度交聯的瓊脂糖凝膠上形成的親(qin) 和層析介質。月旭科技研發的Ni Tanrose 6FF（NTA）不僅(jin) 純化純度較高，通過控製合理的Ni離子密度，結合載量可達到～40mgHis標簽蛋白/ml介質，可以用於(yu) 各種表達來源（如大腸杆菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物細胞）的組氨酸標簽（6xHis-tagged）蛋白的純化。NTA含有四個(ge) 螯合區，較一般的三齒螯合劑能更好的結合Ni2+。6xHis可與(yu) Ni2+螯合，從(cong) 而使His標簽蛋白結合在Ni Tanrose 6FF（NTA）純化介質上，未結合的蛋白被洗滌下去，結合在介質上的蛋白經過一定濃度的咪唑或低pH緩衝(chong) 液被溫和的洗脫下來，從(cong) 而得到高純度的目標蛋白。具有載量高、選擇性好、易於(yu) 再生、成本低等優(you) 點。有了它，再也不用擔心完不成純化任務了。

PreCot Ni 6FF（NTA）是Ni Tanrose 6FF（NTA）的1ml和5ml預裝柱，用來純化6xHis-tagged蛋白，可以使用注射器、蠕動泵，或者液相層析係統（例如AKTA或FPLC）。

Ni Tanrose 6FF（NTA）應用案例

預裝柱：PreCot Ni 6FF（NTA） 5ml

樣品：含有His標簽蛋白（大腸杆菌表達）

平衡液A：50mM Tris-HCl，0.5M NaCl,20mM咪唑pH8.0

洗脫液B：50mM Tris-HCl，0.5M NaCl，0.5M 咪唑，pH8.0

流速：平衡、洗脫-1.0ml/min上樣-0.5ml/min

PreCot Ni 6FF（NTA）純化His標簽蛋白的純化色譜圖

             1：原液

              2：流穿

              3：洗脫（100%B）

              4：原液

              5：流穿

              6：洗脫（100%B）

備注：1-3（樣品和平衡液中不含咪唑）；4-6（樣品和平衡液中含20mM咪唑）

由於(yu) 宿主蛋白中也存在組氨酸和/或半胱氨酸氨基酸殘基，其他的非特異性蛋白與(yu) 靶蛋白一起與(yu) 金屬離子親(qin) 和層析填料結合，造成純化樣品純度不高。提高樣品中的咪唑濃度，組氨酸標簽蛋白通過Ni Tanrose 6FF（NTA），可以一步純化得到85%以上純度的純化樣品。