批次之間重現性不好？解決辦法來這找！

我們(men) 今天再帶來一個(ge) 熱點問題的解決(jue) 思路——“批次性之間重現性不好的解決(jue) 問題”！

Q 開發一個(ge) 新的HPLC方法，結果認證後，方法會(hui) 被轉移到QC實驗室，怎麽(me) 能確保良好的重現性？

如果預期一個(ge) 方法會(hui) 被用到很多年，重現性將是色譜柱選擇過程中的一個(ge) 重要問題，需要確認方法在使用期間，色譜柱一直都在供應，意味著選擇一家大型的願意長期合作的廠商，選擇一種常見的鍵合相，盡量少選擇特殊或者較少使用的固定相。可以先選擇一直合作的品牌開始，還應該從(cong) 廠商出獲得更多的色譜柱規格和批次重現性調查信息，綜合評判。

Q 色譜柱的批次性重現之間的關(guan) 係，怎麽(me) 進行判斷？

以反相填料為(wei) 例：同一批次的填料生產(chan) 出不同的色譜柱，保留時間，塔板數，柱壓，都會(hui) 有點差異。

保留時間的改變與(yu) 填料密度和色譜柱的體(ti) 積成正比，色譜柱體(ti) 積重現性取決(jue) 於(yu) 柱內(nei) 徑，柱內(nei) 徑改變後，保留時間會(hui) 相應改變，但分離度保持不變，那說明你的方法重現性還是比較好的，在我們(men) 製定方法的時候，要正確的規定方法的洗脫時間表。生產(chan) 廠家對柱體(ti) 積改變效應造成的保留時間的改變RSD在3%左右，月旭從(cong) 硬件上進行控製，將該數值控製在1%左右。

色譜柱塔板數的變化也會(hui) 影響方法，特別是涉及到剛好能基線分離的一對色譜峰時，一般情況下塔板數的重現性在±10%左右，標準偏差減少至2-3%，但塔板數是一個(ge) 平方數，分離度取決(jue) 於(yu) 塔板數的2次方根，因此塔板數改變2%意味著峰寬變化隻有1%，可以核查一下色譜柱製造商的塔板數出廠控製數據。

任何填料在生產(chan) 的過程中，柱壓的重現性都比較好。

Q 不同批次之前的重現性問題怎麽(me) 去看待？

不同批次之間的色譜參數的重現性問題，那麽(me) 上麵提到的參數會(hui) 有所改變，更重要的是不同批次的填料有可能引起分離選擇性的變化，一位置相對保留時間會(hui) 變化，表現在色譜圖上的相對位置改變，不利於(yu) 方法的確定。這個(ge) 問題要避免的，可以從(cong) 生產(chan) 商那裏收集批次重現性是否穩定的信息，一般是檢測填料色譜性能的理化參數。

在理化參數中，重要的是填料的比表麵積，因為(wei) 他的改變直接導致保留時間的改變，比表麵積的變化範圍在±10%，月旭控製在±5%。

在化學參數中，鍵合相的便麵覆蓋率的改變對保留時間的影響比較大，通常製造商會(hui) 給出載碳量這個(ge) 數值，會(hui) 有一個(ge) 詳細的數值，通常範圍是±10%，月旭控製在±4%以下。

製造商會(hui) 有一個(ge) 測試色譜重現性的試劑，采用尿嘧啶、苯酚、4-氯硝基苯、甲苯的混合溶液流動相是75%的有機溶劑水的中性條件，對疏水化合物之間的相對保留時間重現性一般比較好，而對於(yu) 載碳量的改變不太敏感，較好的批次重現性測試是在測試混合物中加入堿性化合物，經過優(you) 選的堿性化合物（通常選用阿米替林）在優(you) 化過的條件下，主要和填料上遊離矽醇基相互作用，而中性化合物主要和鍵合相相互作用，這樣，堿性和中性化合物之間的相對保留時間是對反相填料批次重現性的嚴(yan) 格測試。月旭積累了這一類批次重現性的測試數據，並控製在一個(ge) 較小的範圍內(nei) 。

Q 如何確定該款色譜柱對我的實驗有較好的批次重現性？

上麵說到的廠家對重現行的控製和要求，是用於(yu) 選擇色譜柱的起點，終測試是對項目本身的重現性測試，一些生產(chan) 商會(hui) 有不同批次的填料色譜柱包來用於(yu) 具體(ti) 項目測試，而另外一些生產(chan) 商會(hui) 根據客戶的需求提供類似的不同批次的色譜柱，我們(men) 需要的是不同時間鍵合相的相同填料裝填的色譜柱，而不是同一批次填料不同時間裝填的色譜柱，建議使用三個(ge) 不同批次鍵合的填料裝填的色譜柱來測試方法的重現性，如果測試不受填料變化的影響，那可以相信該方法在幾年內(nei) 都是重現的。

看完這一期的“解決(jue) 思路”感覺對您有所幫助嗎？如果能夠幫到您那就是我們(men) 開心的了。